免疫细胞化学标记

（一）涂片的要求

直接涂片、印片法涂片要求尽可能涂得薄而均匀，外力施压或强行抹平会造成细胞变形，制成的涂片不可用。若采用液基法制片，Parvin G.A指出膜滤法并不适合免疫细胞化学，因为滤膜会吸收免疫因子和色素原。这会使得背景着色而导致染色不合格。膜滤法在洗涤步骤时也很容易出现从载玻片上脱落的问题。浆膜腔积液离心涂片时，如果蛋白质含量高，可能会导致蛋白质薄膜沉淀覆盖于细胞上，从而阻止试剂充分渗透。在这种情况下，离心前使用等渗盐水简单地洗涤细胞去除过量的蛋白质。细针吸取的和体腔积液的标本含血液过多时，可能会对免疫细胞化学造成干扰。这些标本可以保存在Saccomanno溶液中，它不仅可以固定标本，还可以溶解红细胞。虽然从先前染过色的涂片上移除盖玻片相对简单，但一些塑料和液膜质地的盖玻片不易移动，并且可能会影响免疫细胞化学效果。

（二）常用方法

免疫组化染色需要一系列环节及过程。包括常规组织切片、微小细胞块切片以及对细胞涂片标本等均可以作免疫细胞化学染色标记（图1-9、图1-10、图1-13、图1-17）。尤其是细胞涂片标本经乙醇或丙酮固定的细胞能够很好地保存抗原，而且细胞定位准确，适合用作免疫细胞化学染色标记。常用的方法有S-P法、PAP法、ABC法。目前常用的是S-P法，即链酶菌抗生物素蛋白-过氧化物酶法。此法可产生低背景、高放大效果，更加简便、敏感和特异。

图1-17　胸腔积液中肺小细胞癌和非小细胞癌细胞块的免疫细胞化学标记

小细胞癌的细胞块常常用来进行免疫细胞化学的标记以与其他小细胞肿瘤区别：Syn阳性（A）说明其为神经内分泌肿瘤，即小细胞癌。TTF-1是区分非小细胞癌中腺癌与鳞状细胞癌的标志物，核表达阳性者为腺癌（B）。Syn×400；TTF-1×400（河南省开封市中医医院徐河流医师提供）

（三）浆膜腔常用标志物

浆膜腔积液标本中作免疫细胞化学标记的目的常常是用来鉴别肿瘤是原发性的间皮肿瘤还是转移的肺或乳腺的腺癌。常用的抗体选择有两组，将敏感度与特异度相结合的方案：

·阳性反应：Calretinin 、Mesothelin、MC CK5 / 6、Vim、NSE 、thrombomodulin。

·阴性反应：TTF-1、E-Cadherin、CEA、Moc-31、BG8（乳腺癌）、CD15。