血涂片制备与染色

【目的】正确掌握血涂片制备与染色方法。

【标本】新鲜全血(EDTA-K 2抗凝)。

【方法】手工推片法、瑞氏染色法。

【试剂】Wright染液、磷酸盐缓冲液(pH 6.8)。

【器材】普通光学显微镜、载玻片、染色架、香柏油、擦镜纸、清洁液等。

【操作步骤】

1.操作前准备:戴口罩、帽子、手套,穿工作服,准备并清点本试验所需器材。

2.取充分混匀的新鲜全血1滴(约0.05ml)滴于载玻片近一端1/3处,握住另一张边缘光滑的推片,以30°～45°使血滴沿推片迅速散开,快速、平稳地推动推片至载玻片的另一端,制成血涂片,待自然干燥。

3.将血涂片平放在染色架上,加Wright染液数滴,以覆盖整个血膜为宜,固定血膜约1min。

4.滴加约等量的缓冲液与染液混和,室温下染色5～10min,用流水冲去染液,待自然干燥后镜检。

5.操作后正确处理医疗垃圾,实验器材归回原位。

【注意事项】

1.血涂片厚薄适宜,分布均匀,有头、体、尾三部分,无空泡。

2.推好的血涂片应尽快使其干燥。天气寒冷或潮湿时,应于37℃恒温箱中保温促干,以免细胞变性缩小。

3.注意掌握血滴的大小、推片的角度和速度,血滴大、速度快、角度大则血膜厚;反之则血膜薄。血细胞比容高于正常时,血液黏度较高,保持较小的角度,可得满意结果;相反,血细胞比容低于正常时,血液较稀,则应用较大的角度、推片速度也应较快。

4.血涂片应在1h内染色,未干透的血膜不能染色,否则染色时血膜易脱落。

5.染色时间要根据染液的浓度、染色时温度、细胞数量适当控制。

6.冲洗时不能先倒掉染液,应用流水冲去,以防染料沉淀在血膜上。

7.染色过淡,可以复染。复染时应先加缓冲液,创造良好的染色环境,而后加染液,或加染液与缓冲液的混合液,不可以先加染液。

8.染色过深可用水冲洗或浸泡在水中一定时间,也可用甲醇脱色。

9.应注意观察红细胞、白细胞等形态及有无寄生虫、原幼稚细胞等异常现象,如有应报告,特别是对病理性的白细胞不能漏检。

【技能要点】

1.严格按照操作步骤操作,动作熟练、迅速、规范。

2.血涂片制备、染色的质量,细胞分布情况等。

(武湘云　李立新)