抗双链DNA抗体（anti-double strand antibodies，抗dsDNA抗体），抗dsDNA抗体的反应位点位于DNA的外围区脱氧核糖磷酸框架上，其靶抗原是细胞核中DNA的双螺旋结构，识别成双碱基对的DNA，同时可与天然或单链DNA反应。抗双链DNA（ds-DNA）抗体是系统性红斑狼疮（SLE）患者血清中的一种标记性抗体，该抗体的存在易引起狼疮性肾炎和典型的蝶形红斑，且抗体的滴度与SLE的活动程度有关。因此检测抗ds-DNA抗体对于SLE的诊断和病情监测具有重要意义。快速斑点免疫金渗滤法（Dot-lmmunogold filtration assay，DIGFA）、间接免疫荧光法（IIF）、酶联免疫吸附试验（ELISA）等方法可以用来检测抗ds-DNA抗体。
【测定方法】
斑点免疫金胶体渗滤法（DIGFA）
1．斑点免疫金胶体渗滤法（DIGFA）原理 此法原理与酶免疫斑点试验大致相似，但以胶体金标记的抗体代替酶标记抗体。预先用亲和素或链亲和素包被硝酸纤维素（NC）膜，再将生物素化的dsDNA结合于其上，将此NC膜固定于渗滤盒中央的圆孔处，其下以吸水填料充实。检测时依次滴加待检测血清（如含抗ds-DNA，则可与NC膜上ds-DNA结合）、洗涤液、金标记SPA、洗液，可在1～2min内完成全部操作。
2．在间接免疫荧光法（IIF）中常用马疫锥虫法（TE-IIF）原理
马疫锥虫（Trypanosoma epuiperdum，TE）是一种致马类性病（马媾疫）的锥虫，对人类和其他家畜无致病作用。TE的动基体为不含组蛋白亦无单链DNA的纯双链DNA（double stranded DNA，ds-DNA），抗原性纯一、特异性高，不需要复杂的分离提纯，故为检测抗ds-DNA抗体的高纯度抗原。稀释后的待检测血清滴加在感染马疫锥虫的小鼠血涂片抗原基质上，如果被检血清中存在抗双链DNA抗原成分的自身抗体，则与抗原基质片中TE的动基体结合抗原抗体复合物（主要是IgG类），再与加入的兔或羊抗人IgG荧光抗体结合，在荧光显微镜下可观察到TE的动基体呈现特异性荧光染色，即为抗双链DNA（ds-DNA）抗体，或称抗天然DNA（native DNA）抗体阳性。
3．酶联免疫吸附试验（ELISA）原理 抗ds-DNA抗体（IgG）ELISA法检测试剂盒中每个微孔板条含有8个可拆分的包被有双链DNA、基因组DNA的微孔。第一次温育时，稀释后的样本在微孔板中反应，如果样本阳性，特异性IgG抗体（包含IgA和IgM）与抗原结合；再加入酶标抗人IgG抗体（酶结合物）进行第二次温育，然后加入酶底物，发生颜色反应。
【参考范围】
1．斑点免疫金胶体渗滤法 渗滤盒孔中央出现红色圆斑与红线为阳性；只出现红色横线为阴性；圆斑与红线均不出现为试剂实效。
2．马疫锥虫法（TE-IIF）参考范围与结果判断 抗双链（ds-DNA）抗体阴性（滴度＜1∶10）。结果判断：当被检血清中存在抗ds-DNA抗体时，在荧光显微镜下可观察到TE核及动基体同时发出亮绿色特异性荧光。
3．酶联免疫吸附法（ELISA） 抗ds-DNA抗体＜100IU／ml。
【临床应用价值】
1．抗双链DNA抗体阳性是系统性红斑狼疮的标志，阳性率达90%以上，有较高的特异性，因而抗双链DNA抗体对系统性红斑狼疮的诊断和治疗监控极为重要。阳性除系统性红斑狼疮外，也是疾病活动性特别是肾脏损伤的标志。还可见于其他结缔组织病、慢性活动性肝炎等。如果健康人血清中检测到此抗体，其中85%的人在5年内可能会发展为SLE。
2．抗ds-DNA抗体存在高亲和力（high avidity）与低亲和力（low avidity）两种特异性的抗体。所谓亲和力是描述多价抗体与能与之结合的有多个决定簇的抗原间形成的复合物质的稳定性术语。低亲和力抗DNA抗体除存在SLE外，也存在于其他风湿性疾病中，对SLE诊断价值较低。高亲和力DNA抗体，对SLE有较高特异性。文献报道第一次Farr法检测阳性病人，85%病人5年内发展为SLE。各种检测方法对两种亲和力的DNA抗体检测适应性不同，低亲和力DNA抗体适应于ELISA法检测，高亲和力DNA抗体适应于Farr法检测。因此，对于抗ds-DNA抗体检测除应用ELISA或IIF法外，还应利用Farr法检测，则会更有益处。
【影响因素】
1．血清标本应新鲜，陈旧血清或有细菌生长、严重脂血、溶血标本不宜检测。试剂盒应置4℃存放，不同批号的试剂不可混合使用。阳性率可因检测方法和疾病活动度的不同有很大差异。
2．胶体金标记的羊抗人IgG（或SPA）为红色透明液体，若变色或出现混浊应废弃。
3．TE-IIF检测抗ds-DNA抗体，如出现TE核或动基体单独发特异性荧光时，报告结果应慎重，应复查并查找原因。PBS偏酸时可出现此种假阳性反应，还应排除荧光抗体稀释度不适造成的非特异性荧光干扰。
（陈 静）
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