诱导免疫耐受

1．胰岛素的免疫耐受

（1）口服法：1991年Zhang等首先发现，给与NOD鼠口服胰岛素后，对自身免疫性糖尿病有预防作用，1998年Ploix等对口服胰岛素免疫机制进行了探讨，说明了细胞因子的分泌从致病性的Th1型向保护性的Th2型转变，研究还发现抗原剂量在激发抑制效应方面起重要作用。其他口服胰岛素制剂还包括：霍乱毒素无毒部分与人胰岛素的复合物、胰岛素的B链、胰岛素B链与谷氨酸脱羧酶溶合成的肽段等，他们也有预防糖尿病的作用。Ploix等将口服胰岛素干预后的NOD小鼠作为T细胞供体，与糖尿病的T细胞混合后注射给裸鼠，发现实验组糖尿病发病率为零，胰岛含有高水平的IL－4，TFN－γ为阴性，IL－4mRNA表达增加，IL－10mRNA和转化生长因子－β（TGF－β）检测不到。以上结果提示，口服胰岛素诱导机体Th2细胞的免疫效果加强，从而产生对自身免疫性糖尿病的保护作用。尽管胰岛素口服可以诱发NOD小鼠免疫耐受而防止糖尿病的发生，但大样本人群实验结果显示口服胰岛素自身抗原并不能阻止糖尿病的发生。

（2）注射法：每日小剂量胰岛素皮下注射诱导免疫耐受的方法早已被证实，新的方法是将胰岛素A链或B链给予NOD鼠皮下注射，可以降低糖尿病的发病率，注射胰岛素诱发免疫耐受的机制尚不清楚，但似乎A链优于B链，而口服胰岛素则是B链效果更佳。Cetkoric－Crrlje等给4周龄的雌性NOD小鼠一次性胸腺内注射胰岛素的A链或B链，结果发现到24周龄时，对照组的发病率为100%，胰岛素A链处理组的发病率为90%，而胰岛素B链处理组的发病率仅为55%，并且胰岛素B链处理鼠的胰岛浸润淋巴细胞IL－4和IL－10的转录水平上调，但并未发现IFN－γ转录水平下调。

（3）气雾法：在糖尿病的亚临床期给予NOD鼠胰岛素气雾剂治疗，可使胰岛炎和临床糖尿病的发生显著降低，使血循环中针对胰岛素的抗体数量增多。

2．谷氨酸脱羧酶（GAD）

（1）腹腔注射：刘芳等研究发现，给予NOD鼠腹腔注射GAD，可恢复Ts（CD＋8）细胞的功能，保护β细胞的超微结构，减轻胰岛炎症程度，延缓糖尿病发生。杨竹林等发现，GAD能减轻NOD小鼠胰岛炎症的发生程度，并与抑制细胞凋亡的Bcl－2蛋白表达水平有关。Maron等发现，GAD可促进NOD鼠的T细胞克隆分泌IL－4，IL－10和TGF－β，抑制IFN－γ的分泌，从而诱导GAD65特异性免疫调节性T细胞分化为以Th2细胞为主，TH1细胞处于不答应状态，最终抑制糖尿病的发展。Ogino等检测出NOD小鼠T细胞GAD65表位的3种氨基酸序列（P247～266，P509～528，P524～543），并用重组的GAD65肽链疫苗接种幼龄NOD小鼠，结果证实其可以防止NOD小鼠胰岛炎及糖尿病的发生。

（2）口服法：口服GAD抗原可诱导对B细胞自身抗原的免疫耐受，在1型糖尿病发病早期，终止其自身免疫反应，完全有可能使B细胞自我修复，分泌适量的胰岛素，改善代谢，从根本上根治1型糖尿病。GAD的优势是它是机体的自身组织，无明显的毒副作用，特异性高，安全有效，因而是很有前途的防治方法。

（3）静脉注射法：Kaufman给3周龄雌性NOD小鼠静脉注射50μgGAD65，结果发现，12周龄时，经GAD处理的NOD小鼠有75%脾淋巴细胞对GAD无反应，表明已产生完全耐受。对GAD完全耐受的鼠对B细胞的其他自身抗原也无反应，且完全不发生胰岛炎。

（4）鼻点：Maron等给予GAD口服或滴鼻可观察到IL－4，IL－10升高，IFN－γ减少。

3．热休克蛋白（HSP60）　Fanciso等研究发现，给予NOD小鼠注射HSP60的一个肽链P277，能明显抑制或延缓糖尿病和胰岛炎的进展，增加脾脏T细胞IL－4和IL－10的分泌，而Thl细胞对HSP60及另外两种自身抗原－胰岛素和GAD的自身免疫减弱，提示HSP60－P277能促使T细胞分化，使免疫反应以Th2细胞为主。Kaufman等研究证实，用热休克蛋白处理的NOD小鼠只能引起对该抗原的免疫耐受却不能防止T细胞对其他抗原的反应，也不能防止胰岛炎的产生。静脉注射HSP60肽P277并不能诱导NOD小鼠产生对糖尿病的抗性，而皮下注射P277加不完全福氏佐剂可以抑制糖尿病的发生，甚至可以抑制STZ诱导的自身免疫性糖尿病的发生。

4．其他　可用于诱导免疫耐受且被证实有效的抗原还有：大肠埃希菌脂多糖、克雷伯杆菌脂蛋白、乳酸杆菌酪蛋白、霍乱毒素分子B亚单位。阻断协同刺激分子也可诱导免疫耐受，包括给予抗CD40L抗体、抗CD28抗体治疗和给予有缺陷的细胞间黏附分子（ICAM）－1基因治疗。

抗原诱导耐受预防1型糖尿病的试验成果令人鼓舞，抗原给予的剂量和途径似乎是影响因素，但现在对抗原数量的限制性可通过黏膜佐剂而克服，而且胰岛素和GAD作为人体自身抗原，对机体无明显副作用，最新研究表明，应用转基因技术，可由植物生成大量优质、低价、可溶性动物蛋白，这样可食用植物就提供了一个简单而直接的口服抗原，由该转基因植物生成的GAD已成为饮食提供给NOD鼠，并抑制其糖尿病的发展，这就为诱导免疫耐受的广泛应用开拓了广阔的前景。