非发酵菌及其检验

非发酵菌主要是不发酵或不分解糖类的革兰阴性无芽胞需氧杆菌，主要菌属有假单胞菌属、不动杆菌属、产碱杆菌属、莫拉菌属、黄杆菌属等。非发酵菌的鉴定，需用以下几项试验：①培养温度：30℃或室温（18～22℃）。②动力与鞭毛：以30℃或室温12～24h培养物悬滴法为准。③氧化酶试验：除不动杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌及个别假单胞菌外，其余菌均为阳性。④氧化－发酵（O－F）试验：观察细菌氧化利用糖（开管）还是发酵分解糖（闭管）。⑤麦康凯琼脂生长情况：假单胞菌属、不动杆菌属、产碱杆菌属等生长；莫拉菌属、黄杆菌属等不生长。

（一）铜绿假单胞菌属

假单胞菌属的代表菌种，俗称绿脓杆菌，最适生长温度35℃，但4℃不生长；普通平板上长成圆形大小不一，边缘不整齐、扁平、隆起、光滑、湿润菌落；在血平板上长成扁平、湿润的灰（蓝）绿色菌落，周围有透明溶血环；经肉汤培养，液面可形成菌膜，菌液上层为蓝绿色；产生可溶于水和氯仿的蓝绿色无荧光绿脓素及溶于水而不溶于氯仿的绿色荧光素；抗原构造：有菌体（O）抗原、鞭毛（H）抗原、黏液（S）抗原、菌毛抗原；对干燥、紫外线有抵抗力，但对热抵抗力弱；有多种毒力因子：黏附素、外毒素、绿脓素、多糖荚膜、弹性蛋白酶、磷脂酶C等。生化反应：氧化酶阳性，能氧化利用糖，不产生吲哚，不产生H2S，液化明胶，分解尿素，还原硝酸盐。

引起的感染常见于烧伤或创伤后，严重者可引起败血症，死亡率甚高，最大剂量应用青霉素、头孢他啶和氨基糖苷类抗生素联合治疗。检验：采集相应标本（如血液、脑脊液、胸腔积液、腹水、尿液、脓液以及分泌物等）作初步分析，依据生化反应特征最后鉴定。

（二）嗜麦芽窄食单胞菌属

无芽胞、无荚膜，有动力，菌落不溶血，有黄色素；氧化酶阴性，可水解七叶苷，液化明胶，DNA酶阳性并可使赖氨酸脱羧，氧化分解麦芽糖。条件致病菌，治疗首选磺胺类、喹诺酮类，对亚胺培南天然耐药。

（三）不动杆菌属

无芽胞、无鞭毛、专性需氧菌。“三阴”特征：氧化酶阴性，硝酸还原试验阴性，动力阴性。条件致病菌，可引起医院感染。

（四）产碱杆菌属

为周毛菌，液体培养基浑浊生长，液面形成菌膜，管底形成黏液沉淀；氧化酶、触酶均阳性，不分解糖类，不分解尿素，不产生H2S，不产生吲哚，不液化明胶。条件致病菌，常引起医院感染，可选用喹诺酮类药物治疗。

（五）军团菌属

无芽胞、无鞭毛的需氧菌，最适生长温度36℃，在含有2．5%～5%CO2环境中生长良好，初次分离需含L半胱氨酸的BYCE培养基，培养基中含铁盐可促进生长，细菌触酶阳性，部分菌株氧化酶阳性，不分解糖类。医院空调冷却水常有此菌，对化学消毒剂敏感。

主要为嗜肺军团菌引起军团病，轻症型类似流感，重症型是以肺部感染为主要特征。通过空气传播，患者吸入污染的气溶胶，细菌进入巨噬细胞和中性粒细胞繁殖导致发病。

（六）嗜血杆菌属

无动力、无芽胞的小杆菌，有流感、副流感、溶血、副溶血嗜血杆菌等。嗜血杆菌须在人工培养基中加入新鲜血液才能生长，故称嗜血杆菌。因新鲜血液中含有Ⅹ和Ⅴ因子，Ⅹ因子为高铁血红素，Ⅴ因子为烟酰胺腺嘌呤二核苷酸。

流感嗜血杆菌：简称流感杆菌，初次分离培养时，5%～10% CO2环境能促进其生长，普通培养基须加入Ⅹ和Ⅴ因子才能生长，在加热血平板（巧克力平板）上生长较佳，与金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上共同培养时，距离葡萄球菌越近菌落越大，距离越远菌落越小，此称为卫星现象；所有菌株还原硝酸盐，典型菌株不溶血；主要通过呼吸道感染，引起原发性或继发性的多种感染。检验：根据菌落形态、涂片染色、卫星现象，Ⅹ、Ⅴ因子需求与否，再做生化试验最后鉴定。提高流感嗜血杆菌阳性率的方法：①初次培养应在5%～10%CO2环境；②在培养基中添加Ⅹ、Ⅴ因子；③应用选择性培养基，如巧克力琼脂中加抗生素。