1．标本的处理 免疫组织化学技术是借助可检测的标记抗体（或抗原），在组织细胞原位进行特异性抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对相应抗原（或抗体）进行定性、定位或定量检测。
（1）标本主要来源：组织标本主要是活组织检查标本、手术切除标本、尸体解剖标本以及动物标本等。
（2）标本的固定与保存：用固定剂使细胞内物质尽可能保持其生活时的状态，使细胞内蛋白质凝固、终止外源性或内源性分解酶活性、保存细胞和组织的抗原性并防止抗原弥散。
（3）切片：最常用的切片方法是冰冻切片法，其最大的优点是能够较完好保存多种抗原，尤其是细胞表面抗原的免疫活性。其他还有石蜡切片、振动切片和塑料切片法等。
2．抗体的处理与保存 免疫组织化学技术的首要试剂是抗体。自制抗血清应用特异性抗原进行亲和层析，去除非特异性抗体。
3．免疫染色与结果判断 ①标记抗体与组织细胞中抗原反应并形成抗原抗体复合物；②用缓冲液冲洗去游离标记抗体；③镜下观察结果。
免疫组化染色后，一般是观察阳性细胞、或阳性抗原（或抗体）在组织细胞片上的定性、定位、定量等。要准确判断免疫组化的阳性与阴性结果，排除假阳性与假阴性结果，在实验中必须设置对照。通常是针对第一抗体设立对照，主要有阳性对照和阴性对照，此外还有替代对照、自身对照和吸收试验等。
4．酶免疫组织化学技术
（1）酶标记抗体免疫组化染色法基本原理：抗体与酶通过共价键连接制成酶标抗体，抗原抗体特异性结合后，再借酶催化底物生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒，在光学显微镜或电子显微镜下进行组织细胞表面及胞内抗原定位。
根据酶标记的部位可将其分为直接法（一步法）、间接法（二步法）、桥联法（多步法）等，直接法是用酶标记第一抗体，间接法是用酶标记第二抗体，其中间接法应用较广。
（2）非标记抗体酶免疫组化染色法：有酶桥法和过氧化物酶抗过氧化物酶（PAP法）。
5．荧光免疫组织化学技术 免疫荧光组织化学是用荧光标记抗体（或抗原），利用抗体与抗原特异性结合反应，通过荧光素的示踪作用，检测组织细胞标本片中相应抗原（或抗体）的定位与分布。除直接法和间接法外，还有补体法和双标记法。
6．免疫金（银）组织化学技术
（1）免疫胶体金标记的原理：胶体金是由氯金酸被白磷、维生素C等还原剂还原成金后形成的金颗粒悬液，在等电点或稍偏碱的溶液中，胶体金颗粒表面的负电荷与Ig（或抗原）的正电荷依靠正负电荷相吸牢固结合，成为胶体金标记Ig（或抗原），称为免疫胶体金。免疫胶体金与对应抗原（或抗体）特异结合形成免疫复合物，常称为免疫金复合物。
（2）免疫胶体金标记物制备的特点
①胶体性质：胶体金具有胶体的多种特性，尤其是对电解质的敏感性。
②胶体金的离子层特性：胶体金颗粒有一个基础金核（原子金Au），其外围有双离子层，紧挨金核表面的是内层负离子（AuCl－2），外层是分散在胶体金溶液中的H＋离子层，H＋离子层可维持胶体金的溶胶状态。
③光吸收性与呈色性：用于免疫组织化学的胶体金颗粒大小一般为5～60nm。在同一种物质的水溶胶中，不同大小的胶体金颗粒光吸收波长和呈色性各不相同，如5～20nm的胶体金颗粒吸收波长520nm，呈现葡萄酒红色；20～40nm的胶体金颗粒吸收波长530nm，呈现深红色；60nm的胶体金颗粒吸收波长600nm，呈现紫色。
（3）免疫金（银）组织化学染色法原理：金标记抗体（或抗原）与细胞或组织切片上相应抗原（或抗体）特异结合后，加入银显色剂，Ag－Ab复合物上带有的金颗粒可将硝酸银离子还原成银原子颗粒沉淀，在金颗粒表面形成一个范围更大、色泽更深的黑色银层，使抗原抗体复合物位置放大，提高了显微镜下的可见度，增强了金免疫技术的敏感性。
7．免疫标记电镜技术 是用电镜可见的示踪物标记诊断抗体（或标准抗原），与组织超薄切片中的相应抗原（或抗体）特异结合，形成不溶性免疫复合物沉淀，用电镜观察标记物，可确定待测抗原（或抗体）的位置。
常用的免疫标记电镜技术有铁蛋白标记免疫电镜技术、酶标记免疫电镜技术、胶体金标记免疫电镜技术。
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