常用混合固定液

（一）10%中性缓冲甲醛液

【试剂】　磷酸二氢钠（NaH2PO4·H2O）4．0g，磷酸氢二钠（Na2HPO4）13g，甲醛（37%）120ml，蒸馏水880ml，pH　7．0。

【适用范围及特点】　该固定液是最常用的固定液，能满足常规HE及免疫组化、PCR等工作。一般无特殊要求的病理标本均适用。

【使用注意事项】　中性缓冲甲醛溶液是以pH　7．0～7．2的磷酸盐缓冲液为溶剂配制的，其固定效果及对组织抗原性的保存均优于一般的10%甲醛固定液。此固定液配制后应密封并保存在阴凉处，保存时间不超过1个月。

（二）乙醇－甲醛液（A－F液）

【试剂】　甲醛（37%）100ml，95%乙醇900ml。

【适用范围及特点】　该固定液有固定兼脱水作用，固定后的标本可直接入95%乙醇脱水。适用于皮下组织中肥大细胞的固定。

（三）Carnoy固定液

【试剂】　无水乙醇60ml，氯仿30ml，冰醋酸10ml。

【适用范围及特点】　此液能固定胞质和胞核，尤其适宜于染色体的固定，对显示DNA、RNA的效果较好。也常用于糖原及尼氏体的固定，糖原储积病的标本可用此固定液固定。但不能保存脂类，不适用于脂肪染色。该固定液可防止乙醇的硬化及收缩作用，增加渗透力，特别适合外膜致密不易透入的组织。以小块组织快速固定为好，一般固定20～40min，较大块组织一般不超过3～4h。

（四）Bouin固定液

【试剂】　饱和苦味酸水溶液（约1．22%）75ml，甲醛25ml，冰醋酸5ml。

【适用范围及特点】　此液为实验室常用固定剂，对组织固定均匀，适于绝大多数器官与组织的固定，适用于结缔组织染色，尤其是三色染色时更为理想，染色效果好。固定液中的冰醋酸能固定染色质，苦味酸能使组织适当硬化，甲醛水溶液可调节前两种试剂对组织的膨胀作用。对脂肪的固定效果好，尤其适用于含脂肪的淋巴结、乳腺组织和脂肪瘤标本的固定。

【使用注意事项】　固定液偏酸，pH　3～3．5，对抗原有一定的损害；使组织收缩，不适宜于标本的长期保存。有一定毒性，应避免吸入或与皮肤接触。为了清除固定后组织块上的黄色，固定后常以70%～80%乙醇反复洗涤。可在洗涤乙醇中加入少量的饱和碳酸锂水溶液加速清除组织块的黄色。

Bouin液可以用80%乙醇150ml，甲醛水溶液60ml，冰醋酸15ml与结晶苦味酸1．0g混合配制。此液比Bouin原液渗透力强，固定时间为1d左右，固定后可直接转入95%乙醇。注意：必须在用前配制。

（五）Zenker固定液

【试剂】　升汞5．0g，重铬酸钾2．5g，蒸馏水100ml。

以上配成Zenker贮存液，冰醋酸5ml（用时加入）。

【适用范围及特点】　Zenker液是一种核固定剂。该液是细胞学及病理学常用的固定剂，对细胞核固定最好，最适合于造血和网状内皮组织的固定。也常作为三色染色的组织固定剂，在三色染色中还可作为媒染剂使用。而对含血量多的组织标本尽量不要选Zenker液固定。

【使用注意事项】

（1）由于Zenker液中含有氧化汞，固定后常需脱去汞黄色。切片脱蜡后脱汞黄色的方法：①用Lugol碘，5min，水洗；②0．5%硫代硫酸钠，5min，流水、蒸馏水洗，并按照染色步骤进行染色。

（2）组织必须用流水冲洗去除重铬酸钾否则乙醇脱水时会引起铬色素沉积。

（3）Zenker液需要避光保存，以免引起化学变化而失效。

（六）Helly液

【试剂】　重铬酸钾2．5g，月升汞5．0g，甲醛5ml，蒸馏水100ml。

【适用范围及特点】　Helly液又称Zenker－Formol液，此液对细胞质固定较好，特别适于显示某些特殊颗粒，尤其对胰岛和脑垂体前叶各种细胞的显示均有良好的效果。此液也用于造血脏器如骨髓、脾、肝等组织的固定，红细胞可得到良好保存。对心肌的闰盘保存也有良好效果。

（七）Maximow液

【试剂】　Zenker储备液100ml，10%甲醛水溶液10ml。

【适用范围及特点】　此液对细胞质固定较好，也用于造血脏器（骨髓、脾、肝）等组织的固定。甲醛可增加对酸性染料的亲和力，稍有促染细胞质的作用。升汞对细胞核的染色较好。

【使用注意事项】　需脱汞处理。

（八）Altmann液

【试剂】　5%重铬酸钾水溶液10ml，2%锇酸水溶液10ml。

【适用范围及特点】　为线粒体、脂肪的良好固定剂，固定白细胞颗粒最好。小块组织固定24h，流水冲洗24h。

【注意事项】　用时配制。

（九）Dafano液

【试剂】　硝酸钴1．0g，甲醛15ml，蒸馏水100ml。

【适用范围及特点】　此液固定高尔基体较好，流水冲洗以后脱水。

（十）甲醛溴化铵液

【试剂】　甲醛15ml，溴化铵2．0g，蒸馏水85ml。

【适用范围及特点】　此液为脑组织的良好固定剂，可用于镀银和镀金染色。

（十一）甲醛－醋酸钠（钙）－升汞液

【试剂】　甲醛10ml，醋酸钠或醋酸钙2．0g，升汞6．0g，蒸馏水90ml。

【适用范围及特点】　此液用时配制，适于固定胰腺组织，对鉴别胰岛细胞较好。

（十二）Kolmer液

【试剂】　5%重铬酸钾水溶液20ml，10%甲醛20ml，冰醋酸5ml，5%三氯醋酸水溶液5ml，10%醋酸钠水溶液5ml。

【适用范围及特点】　由于此液中含有钠盐，适用于固定整个眼球及神经组织。固定时间为24h。

（十三）甲醛－生理盐水

【试剂】　甲醛10ml，生理盐水90ml，pH　7．0。

【适用范围及特点】　此固定液是应用最广的一种，它可以保护脂类和细胞核。在做酸性染色时，如V－G，或三重染色之前，还可以再使用第2次固定。

（十四）Mossman液

【试剂】　甲醛10ml，95%乙醇30ml，冰醋酸10ml，蒸馏水50ml。

【适用范围及特点】　此液用于哺乳动物胚胎，它的渗透力很快，兼有脱钙作用。

（十五）B－5固定液

【试剂】

1．储备液，以下成分充分混合，作为B－5储备液。

氧化汞12．0g，醋酸钠2．5g，蒸馏水200ml。

2．工作液，使用前立即混合。

储备液20ml，甲醛2．0ml。

【适用范围及特点】　B－5固定液是骨髓活检常规固定液，并且在怀疑淋巴瘤时固定淋巴结。

【使用注意事项】

（1）B－5储备液不能使用任何金属用具或金属类盖子，储备液自配制之日起稳定性1年。

（2）经该液固定的标本若长期保存需移入10%甲醛或70%乙醇中固定。

（3）B－5固定的组织切片含有汞沉淀，染色前常需进行脱汞黄色处理（方法同Zenker固定液）。