杂合性缺失的位点和频率

杂合性缺失（loss of heterozygosity， LOH）是指来自父母或双亲一方的等位基因丢失，如果某一肿瘤在特定染色体同一微卫星位点经常发生LOH，那么丢失部位往往存在抑癌基因。

Bates等报道1例复发的垂体癌及转移灶中在1p、3q、13q26、11q13和22q12多个位点存在LOH，进一步对47例侵袭性腺瘤和42例非侵袭性腺瘤不同染色体11个位点检测发现：侵袭性腺瘤LOH的发生率为10.8%，明显高于非侵袭性腺瘤的2.4%，其中75%集中于1p、10q、11q13和13q12-14这4个位点，42.6%侵袭性腺瘤至少有一个位点基因缺失，70%存在多位点的等位基因缺失，且按Hardy分级，肿瘤侵袭性越高，LOH发生率也越高。目前知道，11q13等位基因缺失可导致家族性多发内分泌肿瘤Ⅰ型综合征，也因此确定了抑癌基因MEN1，在一些散发垂体腺瘤特别是功能腺瘤中11q13的LOH也较多见。Pei等报道了1组病例，66.7%侵袭性垂体腺瘤13qRb基因位点有LOH发生，其中3例在该染色体还存在其他位点LOH。Tanaka等对12p上18个微卫星位点进行分析发现，尽管无p27kip1基因LOH发生，但24.2%样本等位率下降。Farrel等在对9p21-22区带内11个微卫星位点检测发现：非侵袭性与侵袭性垂体腺瘤LOH发生率相似，分别为31%和32%。Williamson等研究发现40例功能性腺瘤中3例在1p35-36区有LOH。Clayton等应用X-染色体失活结合LOH对原发和复发垂体腺瘤进行研究，发现原发腺瘤和复发腺瘤LOH变异很大，并提出垂体腺瘤复发可能与瘤细胞系多克隆发生并分化不良有关。

LOH与Rb：Rb基因定位于人13q14，其等位基因缺失或失活可致视网膜母细胞瘤，编码产物（pRb）可与细胞核中转录因子EF结合，启动细胞分裂周期，在G1/S调控点，调节细胞分化中起作用。动物实验证实，有Rb基因LOH的小鼠几乎100%可发生垂体ACTH腺瘤。Woloschak等在42例非侵袭性腺瘤Rb基因17、20内含子均未检测到LOH发生。Zhu等对34例垂体腺瘤检测也有类似报道。但Pei等报道1组7例垂体癌和66.7%侵袭性垂体腺瘤均有Rb基因位点及附近存在LOH，而4例非侵袭性垂体腺瘤及正常对照组无LOH发生。最近Simpson等证实垂体腺瘤中Rb基因可能与5′CpG岛甲基化有关。由上推测Rb基因LOH在人类垂体腺瘤发病早期可能是一少发事件，但部分恶性肿瘤中13q14位点及附近存在LOH，表明Rb基因改变可能在垂体腺瘤生物学行为转变过程中发挥一定的作用，这尚有待于进一步探讨。

也有学者报道了垂体细胞周期蛋白如p27和p16在垂体腺瘤中的异常表达。p16定位于9p21，作为细胞周期依赖激酶抑制药的重要一族，直接参与细胞分裂周期负调控。Farrell等对57例垂体腺瘤在9p21-22区带内，选定了D9S54、D9S199等11个微卫星位点进行LOH分析，结果发现在侵袭与非侵袭腺瘤中均有31.5%发生LOH，表明此区域LOH为肿瘤发生的早期事件，同时对有LOH的标本针对多种肿瘤抑制基因p16和p15分析，运用PCR和3′UTR及Southern杂交均未检测到p16和p15基因缺失。Woloschak等运用定量差异PCR证实仅12%（3/25）垂体腺瘤有p16基因纯合性缺失。Seemann等对功能性腺瘤研究中也有类似报道。以上表明与Rb基因相似，一方面p16基因缺失在垂体腺瘤的发生频率可能较低，另一方面9p21-22区域可能还存在其他抑癌基因参与肿瘤形成，如p15和MTAP（甲硫氨酸磷酸化酶）基因。此外，p16基因调控区5′CpG岛甲基化导致转录表达抑制在肿瘤形成中也发挥了重要作用。

LOH与p27：p27kip1基因定位于染色体12p13.1及12p13.2，与p16基因类似，p27也是细胞周期素依赖激酶抑制药中的重要一员，并被认为是最直接影响细胞周期G1/S调控点的基因，p27过度表达在人类多种肿瘤细胞中可触发凋亡，其蛋白表达水平可作为某些肿瘤预后判断的指标。

尽管动物实验中已证实去除p27基因的小鼠可诱发ACTH腺瘤，但在垂体腺瘤中至今尚未有该基因突变的报道，而且p27基因位点LOH罕见。Dahia等对20例ACTH和1例PRL腺瘤在p27位点均未检测到LOH，Tanaka、Wilson等也有类似的报道，但前者在33例腺瘤中发现8例p27位点等位率下降54%～64%，且检测到3处多态位点，分别是密码子55（GCC-GCA）、109（GTC-GGC）、115（GCC-GCA）。Lidbar等对包括107例多种类型腺瘤的研究中报道，p27蛋白表达在垂体腺瘤，特别是ACTH腺瘤中明显低于正常对照组，在侵袭性腺瘤和垂体癌中明显低于非侵袭组。由此可见，尽管p27突变及LOH在垂体腺瘤中罕见，但p27蛋白可能在翻译和翻译后参与部分功能性腺瘤的形成，并与某些腺瘤侵袭性改变有关。综合上述，垂体腺瘤在1p、9p、10q、11q、13q等多条染色体不同位点存在较为普遍的LOH，肿瘤细胞因LOH易导致相应位点抑癌基因缺失和失活，这不仅与肿瘤发生有关，而且可能在部分腺瘤生物学行为改变过程中发挥作用。