中国对虾细胞色素基因的原核表达

细胞色素P450酶系（cytochrome P450monooxygenases， 简称CYP）是广泛存在于几乎所有生物体中的一类代谢酶（冷欣夫等，2001），是一簇结构、性质相似而又有差异， 由基因超家族编码的含血红素和硫羟基的结合蛋白，可以代谢多种内源物质（ 保幼激素及其类似物、蜕皮甾酮、脂肪酸和信息素等）和外源物质（药物、环境毒物等），与生物的生长发育、环境适应密切相关，具有重要的生物学意义（Matthias et al，2008）。虽然海洋无脊椎动物体内细胞色素P450酶的含量较之哺乳动物要低很多（Elmamlouk et al，1976），但其在海洋无脊椎动物中所起的作用却受到人们极大的关注。

CYP4家族是细胞色素P450酶系中最古老的家族之一，大约起源于12.5亿年以前（Simpson，1997），目前在人类、大鼠、鱼及多种节肢动物体内均有发现， 其功能涉及脂肪酸的ω-羟化反应及保幼激素的降解等多种内源性物质的代谢， 同时也参与多种外源化合物的代谢。有关无脊椎动物编码CYP4 蛋白相关基因的研究在昆虫中取得了较好进展，中国学者先后由致倦库蚊溴氰菊酯抗性株及淡色库蚊抗溴氰菊酯品系内克隆得到的细胞色素P450，经比对均属于CYP4家族（腾达等，2004；李秀兰等，2005），说明CYP4家族可能与动物体内溴氰菊酯代谢有关。目前有关海洋无脊椎动物细胞色素P450的研究主要集中在基因克隆及功能分析方面。CYP4基因在许多海洋甲壳动物中都有发现，包括青蟹（Carcinusmaenas）（Rewitz et al，2003）、利莫斯螯虾（Orconectes limosus）（Chantal et al，1999）、湖虾（Penaeussetiferus）和美洲螯龙虾（Homarus ameri-canus）等，并研究了CYP4基因对苯并芘、多氯联苯、多环芳烃等环境污染物的响应（Snyder，1998）。中国对虾主要分布于中国黄渤海和朝鲜西部沿海，是中国主要的养殖虾类，而有关中国对虾细胞色素P450基因的相关研究还未见报道。张喆等（2011）根据本室克隆得到的中国对虾CYP4基因cDNA序列设计引物， 构建CYP4 基因表达载体，实现该基因在大肠杆菌（Escherichia coli）中的原核表达，并对表达条件进行优化。为今后制备免疫抗体，建立免疫组化方法对中国对虾CYP4基因功能研究奠定了基础。