任务4 染色液与指示剂
1．染色液
1）简单染色液
石炭酸复红染液：A液为3%的碱性复红乙醇溶液；B液为5%石炭酸溶液。
将0．3g碱性复红在研钵中研磨后，逐渐加入10mL 95%乙醇，继续研磨使其溶解，配制成A液。
将5．0g石炭酸溶解于95mL蒸馏水中，配制成B液。
取A液10mL、B液90mL，混合即可。一般可将此溶液稀释5～10倍使用，但稀释液易变质失效，一次不宜多配。
2）革兰氏染色液
（1）草酸铵结晶紫染液：A液为1%的结晶紫（crystal violet）乙醇溶液（结晶紫2．0g，95%乙醇20mL）；B液为1%的草酸铵（ammonium oxalate）溶液（草酸铵8．0g，蒸馏水80mL）。
取A液20mL、B液80mL混合，静置48h后使用。
（2）卢戈氏（Lugol’s）碘液：碘片1．0g，碘化钾2．0g，蒸馏水300mL。
先将碘化钾溶解在少量水中，再将碘片溶解在碘化钾溶液中，待碘全部溶解后，加水即可。
（3）95%乙醇溶液。
（4）番红（沙黄）染液：番红2．5g，95%乙醇100mL。
取上述配好的番红乙醇溶液10mL与90mL蒸馏水混匀即可。
3）芽孢染色液
（1）5%孔雀绿染液：孔雀绿5g，蒸馏水100mL。
（2）0．5%番红染液：番红0．5g，蒸馏水100mL。
4）荚膜染色液
（1）5%黑色素水溶液：黑色素5g，蒸馏水100mL，40%甲醛（福尔马林）0．5mL。
将黑色素在蒸馏水中煮沸5min，配成5%的溶液，然后加入福尔马林作防腐剂。
（2）番红（沙黄）染液：与革兰氏染色液中番红染液相同。
5）鞭毛染色液（银染色法）
A液：单宁酸5．0g，FeCl31．5g，15%甲醛（福尔马林）2．0mL，1%NaOH溶液1．0 mL，蒸馏水100mL。
待A液FeCl3溶解后，加入1%NaOH溶液1mL和15%甲醛溶液2mL。配好后需当日使用，次日效果差，第三日则不可使用。
B液：2%AgNO3溶液（AgNO32g，蒸馏水100mL）。
待AgNO3溶解后，取出10mL备用。向其余的90mL AgNO3中滴加浓NH4OH，形成浓厚的悬浮液。继续滴加NH4OH，直到新形成的沉淀又重新刚刚溶解为止。再将10 mL备用的AgNO3溶液慢慢滴入，此时出现薄雾，轻轻摇动后，薄雾状沉淀消失，再滴入AgNO3溶液，直到摇动后仍呈现轻微而稳定的薄雾状沉淀为止。若所呈现的雾不重，此染液可使用一周；若雾重，则银盐易沉淀出，不宜使用。
2．指示剂
1）简单指示剂
（1）麝香草酚蓝或百里酚蓝。
变色范围：pH 1．2～2．8，颜色由红→黄。常使用浓度为0．04%的乙醇溶液。
配制方法：称取0．1g指示剂溶于100mL 20%乙醇中，或称取0．1g指示剂，加入21．5mL 0．01mol／L NaOH溶液，再加入蒸馏水至250mL。
（2）溴麝香草酚蓝或溴百里酚蓝。
变色范围：pH 6．0～7．6，颜色由黄→蓝。常用浓度为0．04%。
配制方法：称取0．1g指示剂，加入16mL 0．01mol／L NaOH溶液，然后加入蒸馏水定容至250mL。
（3）溴酚蓝。
变色范围：pH 3．0～4．6，颜色由黄→紫。常用浓度为0．04%。
配制方法：称取0．1g指示剂，加入14．9mL 0．01mol／L NaOH溶液，再加入蒸馏水至250mL；或称取0．1g指示剂溶于100mL 20%乙醇溶液中，再加入蒸馏水定容至250mL。
（4）溴甲酚绿。
变色范围：pH 3．8～5．4，颜色由黄→蓝。常用浓度为0．04%。
配制方法：称取0．1g指示剂，加入14．3mL 0．01mol／L NaOH溶液，再加入蒸馏水至250mL。
（5）溴甲酚紫。
变色范围：pH 5．2～6．8，颜色由黄→紫。常用浓度为0．04%。
配制方法：称取0．1g指示剂，加入18．5mL 0．01mol／L NaOH溶液，再加入蒸馏水至250mL。
（6）甲基红。
变色范围：pH 4．2～6．3，颜色由红→黄。常用浓度为0．04%。
配制方法：称取0．1g指示剂，加入150mL 95%乙醇溶液进行溶解，再加入蒸馏水至250mL。
（7）甲基橙。
变色范围：pH 3．1～4．4，颜色由红→橙黄。常用浓度为0．04%。
配制方法：称取0．1g指示剂，加入3mL 0．01mol／L NaOH溶液，再加入蒸馏水至250mL。
（8）石蕊。
变色范围：pH 5．0～8．0，颜色由红→蓝。常用浓度为0．5%～1．0%。
配制方法：称取0．5～1．0g指示剂溶于100mL蒸馏水中即可。
（9）酚红。
变色范围：pH 6．8～8．4，颜色由黄→红。常用浓度为0．02%。
配制方法：称取0．1g指示剂，加入28．2mL 0．01mol／L NaOH溶液，再加入蒸馏水至500mL。
（10）酚酞。
变色范围：pH 8．2～10．0，颜色由无色→红色。常用浓度为0．1%。
配制方法：称取0．1g指示剂，溶于100mL 60%乙醇溶液中。
2）混合指示剂
混合指示剂分为两种：一是由两种解离常数K值相近的指示剂混合而成；一种是由指示剂与惰性染料混合而成，利用其颜色互补，使终点变色更加敏锐。
注意：凡标有＊记号的，是必须储存于棕色试剂瓶中的指示剂。
（1）甲基黄－亚甲蓝。
变色点：pH 3．25，颜色由蓝紫→绿。
配制方法：1体积1g／L甲基黄的乙醇溶液与1体积1g／L亚甲蓝的乙醇溶液混合，摇匀。
（2）溴甲酚绿－甲基红。
变色点：pH 5．1，颜色由酒红→绿。
配制方法：3体积1g／L溴甲酚绿的乙醇溶液与1体积2g／L甲基红的乙醇溶液混合，摇匀。
（3）甲基红－亚甲蓝＊。
变色点：pH 5．4，颜色由红紫→绿。
配制方法：1体积2g／L甲基红的乙醇溶液与1体积1g／L亚甲蓝的乙醇溶液混合，摇匀。
（4）甲基橙－靛蓝胭脂红。
变色点：pH 4．1，颜色由紫→绿。
配制方法：1体积1g／L甲基橙水溶液与1体积2．5g／L靛蓝胭脂红水溶液混合，摇匀。
（5）中性红－亚甲蓝＊。
变色点：pH 7．0，颜色由紫蓝→绿。
配制方法：1体积1g／L中性红的乙醇溶液与1体积的1g／L亚甲蓝的乙醇溶液混合，摇匀。
（6）中性红－溴百里酚蓝。
变色点：pH 7．2，颜色由玫瑰红→绿。
配制方法：1体积1g／L中性红的乙醇溶液与1体积1g／L溴百里酚蓝的乙醇溶液混合，摇匀。
（7）花青（染料）－酚红。
变色点：pH 7．2，颜色由玫瑰红→绿。
配制方法：2体积1g／L花青（氮萘蓝）的50%乙醇溶液与1体积1g／L酚红的50%乙醇溶液混合，摇匀。
（8）酚酞－甲基绿＊。
变色点：pH 8．9，颜色由绿→紫。
配制方法：1体积1g／L酚酞的乙醇溶液与2体积1g／L甲基绿的乙醇溶液混合，摇匀。
（9）百里酚蓝－酚酞。
变色点：pH 9．0，颜色由黄→紫。
配制方法：1体积1g／L百里酚蓝的50%乙醇溶液与3体积1g／L酚酞的50%乙醇溶液混合，摇匀。
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