加帽和加()

十四、转录后事件II：加帽和加poly(A)

1.用³H-AdoMet和³²P标记带帽的真核mRNA，再用碱消化，消化产物进行DEAE-celluose层析。用已知电荷的寡核苷酸marker显示洗脱的cap1。画出cap1的结构图，并解释它的表观带电性。

2.如何得知帽子中含有7-甲基鸟嘌呤？

3.简述加帽过程的步骤。

4.用实验证明加帽对RNA稳定性的作用。

5.用实验证明加帽和加poly(A)过程对翻译的协同作用。

6.用实验证明加帽对mRNA转移到细胞质的作用。

7.用实验证实poly(A)的大小。

8.如何得知poly(A)是加在mRNAs的3ˊ端？

9.如何得知poly(A)是在转录后加上的？

10.用实验证明poly(A)对mRNA的可译性、mRNA稳定性和把mRNA招募到多聚核糖体中的作用。

11.画出加poly(A)的过程，从RNA将要延伸到poly(A)位点处开始。

12.用实验证明转录不是停止在poly(A)位点处。

13.用实验证明AAUAAApoly(A)序列的重要性。其他什么基序可以替换AAUAAA？相对于AAUAAA，这些序列位于何处？

14.用实验证明G/U丰富和U丰富的poly(A)基序的重要性。相对于poly(A)位点，这些序列位于何处？

15.用实验证明RPB1CTD在加poly(A)序列之前对切割pre-mRNA的作用。

16.将一段合成的poly(A)位点插入到兔β球蛋白基因大内含子处，加poly(A)过程将会发生什么变化？当这些内含子拼接被破坏时，加poly(A)过程会如何？如何解释这些结果？

17.用实验证明poly(A)多聚酶和特异因子CPSF的重要性。

18.实验题：在含有变化的AAUAAA基序的poly(A)底物末端加上40个A，会有什么结果？

19.用实验证明：CPSF结合AAUAAA，而非AAGAAA。

20.实验题：在有或没有oligo(A)的情况下，CPSF和PABII对含有AAUAAA或AAGAAA基序的底物加poly(A)过程的影响。如何解释结果？

21.作图示意加poly(A)的过程，并显示CPSF、切割酶、poly(A)聚合酶、RNA聚合酶II、(PAP)和PABII的作用。

22.poly(A)聚合酶PAPI的哪部分为加poly(A)过程所必需的？给出证据。

23.用实验证明：胞质poly(A)元件(CPE)对于胞质加poly(A)过程是必需的。

24.用实验证明：帽子结构在pre-mRNA拼接第一个内含子过程中起重要作用。

25.用实验证明：poly(A)影响pre-mRNA最后一个内含子的拼接。