【摘要】：实验十六 目的DNA片段在基因组中存在和拷贝数的分析一、实验原理基因组DNA在物理结构上分属于不同染色体DNA，呈线状结构。对其中一段DNA片段在基因组中存在与否和数目的鉴定可以采用Southern杂交的方法进行。电泳后将琼脂糖凝胶中的DNA转移到硝酸纤维素膜或尼龙膜上，用特异DNA序列的探针进行杂交，可鉴定特异DNA序列在基因组中的存在与否。
目的片段在基因组中存在和拷贝数的分析_基金工程与分子生
实验十六 目的DNA片段在基因组中存在和拷贝数的分析
一、实验原理
基因组DNA在物理结构上分属于不同染色体DNA，呈线状结构。对其中一段DNA片段在基因组中存在与否和数目的鉴定可以采用Southern杂交的方法进行。由于完整的DNA分子太长，一般的琼脂糖凝胶孔径不够大，不能在常用浓度的琼脂糖凝胶中电泳分离。因此用限制性内切酶将完整的DNA分子切成适当大小的片段，再进行电泳分离。由于特定基因型基因组DNA序列一定，特定酶切后DNA电泳图谱一定。电泳后将琼脂糖凝胶中的DNA转移到硝酸纤维素膜或尼龙膜上，用特异DNA序列的探针进行杂交，可鉴定特异DNA序列在基因组中的存在与否。同时如果该片段在不同大小的酶切片段中存在，也可以鉴定在基因组中的拷贝数。然而这种方法获得的结果也可能是假阳性，因为相似的序列也可能杂交上。这种方法初步提供了鉴定DNA片段在基因组中存在与拷贝数的一种方法。
二、实验设计
1.提取基因组DNA，尽可能保持DNA分子的完整性，不同小组可以提取不同品种或不同物种的基因组DNA(参照实验一)。
2.对基因组DNA进行单酶切(参照实验一)。
3.取适量单酶切好的基因组DNA进行电泳(参照附录1)。
4.制备探针(参照实验九、附录8)。
5.转膜和进行Southern杂交(参照实验十)。
三、结果分析
1.对转膜结果进行分析。分析实验过程中各种因素对结果的影响。
2.如果电泳分离了不同品种或不同物种的基因组DNA，进行比较分析。
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