衣原体间接红细胞凝集试验

8.8　衣原体间接红细胞凝集试验

8.8.1　用途

衣原体病间接红细胞凝集试验，适用于各种畜禽衣原体病的检疫。

8.8.2　材料准备

敏化红细胞为鹦鹉热衣原体纯化灭活抗原制敏的雄性绵羊红细胞。

阳性对照血清，阴性对照血清。

上述试剂由中国农业科学院兰州兽医研究所生产。

V型96孔微量滴定板、微量混合器、25μl、50μl微量移液器。

8.8.3　操作方法

待检血清的灭活：奶牛血清60℃，灭活30分钟。

被检血清的稀释

在血凝板的1～8孔每孔滴加稀释液50μl。

用微量移液器吸取被检血清50μl加入第一孔，充分混匀后再吸取50μl加入第二孔中……依次作倍比稀释至第8孔（1:256），混匀后弃去50μl。

每孔滴加1%敏化红细胞液25μl。

对照试验敏化红细胞空白对照1孔；阳性血清1:64加敏化红细胞1孔；阴性血清加敏化红细胞1孔。

8.8.4　结果判定

1.凝集程度的标准

++++：红细胞全部凝集，成一均匀的膜，布满整个孔底。

+++：红细胞在孔底形成一层膜，面积比前者稍小。

++：红细胞在孔底形成薄层凝集，边缘松散或呈锯齿状。

+：红细胞在孔底呈小圆点，周围有稀疏、散在少量凝集。

±：红细胞沉于孔底，但周围不光滑或中心有空斑。

-：红细胞完全沉于孔底，呈光滑的圆点。

2.各项对照的正确结果

敏化红细胞应无自凝（-）；阳性对照血清应为（++++）；阴性对照血清为（-）。

3.结果判定

奶牛血凝效价≥1:64（++）判为阳性；奶牛血凝效价≤1:4（++）判为阴性；血凝效价介于两者之间为可疑。可疑者复检，仍为可疑判为阳性。

8.8.5　稀释液的配制

稀释液含1%健康灭能兔血清的0.15mol/L,pH7.2 PBS配制：

Na₂HPO₄·12H₂O

19.34　克

KH₂PO₄

2.86　克

NaCl

4.25　克

蒸馏水

加至500毫升

15磅30分钟灭菌。

取1毫升健康灭能兔血清加入100毫升上述配制好的PBS中，混匀。