羊型口蹄疫疫苗穴位与常规免疫效果的比较试验

羊型口蹄疫疫苗穴位与常规免疫效果的比较试验_阿拉善动物疾病研究

李国中1　明亚娟2　杨淑英1　罗建勇3　乌兰扣4

（1.内蒙古阿拉善左旗兽医工作站　巴彦浩特　750300；2.内蒙古阿拉善左旗农畜产品质量安全中心巴彦浩特　750300；3.内蒙古阿拉善左旗农牧业局　巴彦浩特　750300；4.内蒙古阿拉善左旗巴彦浩特动物卫生监督站　巴彦浩特　750300）

摘　要：小剂量的O型口蹄疫疫苗进行穴位免疫，抗体效价能否达到合格，本课题组用羊对O型口蹄疫疫苗穴位免疫和肌肉免疫进行了对比试验。结果注苗21d后，穴位免疫组的血凝价显著高于肌肉免疫组；注苗4个月后，穴位常量组血凝价极显著高于肌肉免疫组，穴位半量组血凝价显著高于肌肉组。后海穴是进行O型口蹄疫疫苗穴位免疫的最佳穴位。

关键词：羊；O型口蹄疫疫苗；穴位免疫

穴位免疫注射应用于兽医临床，它既不同于西医的肌肉注射的给药途径，也不同于传统的针灸疗法，它是将具有免疫作用的疫苗注入一定穴位，从而借助疫苗对穴位的刺激，放大疫苗的免疫作用，增强机体免疫功能[1]。阿拉善左旗近几年在进行O型口蹄疫疫苗注射时，疫苗反应较重，出现流涎，下颌麻痹等症状，更严重的是引起流产。猪O型口蹄疫疫苗风池穴注射抗体效价高于耳根部肌肉注射[2]，羊O型口蹄疫疫苗穴位免疫还没有人做过试验。故本课题组采用穴位注射疫苗的方法，从2002年11月至2003年9月在巴彦浩特镇扎海乌素嘎查进行羊O型口蹄疫疫苗穴位与常规免疫效果的比较试验，现报告如下。

1材料

1.1O型口蹄疫灭活疫苗：内蒙古生物药品厂生产，生产日期0202021～3，有效期030222。用法：4～24月龄的即小羊每只1ml；24月龄以上的即大羊每只2ml，免疫持续期6个月。疫苗批准文号：农生药字第（2001）047735。

1.2正向间接血凝抗原

中国农业科学院兰州兽医研究所，批号分别为20020615和20030724，有效期6个月，效价1∶1024，装量5 ml。

1.3稀释液中国农科院兰州兽医研究所生产

1.4 阳性对照血清

效价1∶1024，装量1 ml，批号分别为20020616和20030324，有效期6个月，兰州兽研所生产。

1.5阴性对照血清

批号分别为20020430和20030324，装量1ml，兰州兽研所生产。

1.6待检血清各2 ml，采自不同时间的21只不同的羊。

1.796孔110～120℃V型医用血凝板，与血凝板大小相同的玻璃板若干个。

1.820～100 μl可调式微量移液器，与该移液器配套的塑料嘴若干个。

1.9微量振荡器一台。

2方法

2.1试验设计

将21只羊分成三组：第一组为A组，耳标编号A1～A7，采用肌肉注射小羊1 ml，大羊2 ml；第二组为B组，耳标编号B1～B7，采用后海穴注射小羊1 ml，大羊2 ml；第三组C组，耳标编号C1～C7，采用后三里穴注射，小羊0.5 ml，大羊1 ml。采血时间选在注苗后的第21 d，第4个月，第8个月。

2.2正向间接血凝试验

2.2.1加稀释液

在血凝板第一排1～4孔，第二排1～12孔，其余各排1～9孔分别加稀释液50 μl。

2.2.2加阴阳性对照血清

在血凝板第1排第1孔加阴性血清50 μl，并将塑料嘴插入孔底，右手拇指轻压弹簧1～2次，混匀（避免产生过多气泡）后取50 μl移至第2孔，混匀后取出50 μl移至第3孔，直至第4孔混匀后弃去50 μl，此时阴性血清对照孔依次为1∶2（1）1∶4（2）1∶8（3）1∶16（4）。在血凝板第2排第1孔加阳性血清50 μl对倍稀释至12孔，混匀后弃去50 μl，此时阳性血清稀释倍数为1∶2～1∶4096。

2.2.3稀释待检血清

在血凝板第3排第1孔加1号待检血清50 μl，对倍稀释至第9孔，混匀后弃去50 μl。依此类推至第21号待检血清。但在每取1份血清时必须更换塑料嘴。

2.2.4加血凝抗原

阴性血清、阳性血清、待检血清各孔均加血凝抗原25 μl。

2.2.5振荡

将血凝板置于微量振荡器上振荡1 min，然后将血凝板放在白纸上观察，各孔红细胞是否混匀，不出现血球沉淀为合格，盖上玻璃板，25℃下静置2 h后判定结果。

2.2.6判定标准

阴性血清1～4孔无凝集现象或仅出现“+”凝集，阳性血清1～8孔凝集，9～12孔无凝集。在对照孔合格的前提下，再观察待检血清各孔，以呈现“++”凝集的最大稀释倍数为该份血清的抗体效价。

3结果

3.1试验羊注苗后21 d血凝价（HA）见表1，注苗后4个月血凝价（HA）见表2。

表1　注苗后21d试验羊血凝价（HA）

3.2由表1可知穴位免疫与肌肉免疫相比较，穴位常量组的血凝价（xB=109.71）明显高于肌肉常量组的血凝价（xA=75.43）差异显著（p＜0.05）。穴位半量组血凝价（xC=50.28）与肌肉常量组的血凝价（xA=75.43）相比较差异不显著（p＞0.05）。说明穴位免疫比肌肉免疫具有更强的免疫原性。

3.3穴位常量与半量免疫相比较，常量组血凝价（xB=109.71）明显高于半量组血凝价（xC=50.28）差异显著（p＜0.05）。说明穴位免疫和疫苗剂量的关系同样十分密切，剂量不足对机体免疫系统刺激能力较低，不能达到有效免疫。

表2　注苗后4个月试验羊血凝价（HA）

3.4由表2可见羊注射O型口蹄疫灭活苗4个月后：后海穴常量组同肌肉常量组相比较，穴位常量组的血凝价（xB=29.71），明显高于肌肉常量组的血凝价（xA=2.571），差异极显著（p＜0.01）；后三里穴半量组的血凝价（xC=25.14），明显高于肌肉常量组（xA=2.571），差异显著（p＜0.05）。说明穴位免疫比肌肉免疫抗体维持的时间要长得多。

3.5羊注射O型口蹄疫灭活苗8个月后，穴位免疫组仍保持一定的抗体效价：其中B2、B5号羊血凝价为4，C7号羊的血凝价为16。

3.6羊O型口蹄疫疫苗穴位与常规免疫效果的比较试验，没有出现流产现象，说明O型口蹄疫免疫注射只要不在怀孕初期和妊娠后期就不会引起流产，流产的主要原因是抓羊不稳或机械性作用造成的。从三个不同途径免疫出现的副作用看：肌肉免疫出现食欲减退、发热的羊2只，占注射羊的28.57%；后三里穴免疫出现跛行的羊1只，占注射羊的14.29%；后海穴免疫没有出现副作用。由该试验可知，后三里穴对疫苗的放大作用最明显，但能出现跛行等副作用。后海穴注射O型口蹄疫疫苗副作用小，易操作，而且抗体维持时间长，是最佳的免疫穴位。

4小结与讨论

4.1中医针灸理论认为，针灸特定的穴位可以提高动物机体的免疫功能，平衡机体生理代谢。本试验进行羊O型口蹄疫疫苗穴位免疫注射具有穴位和疫苗免疫的双重性，可促进机体特异性抗体的增长。

4.2穴位注苗能增强巨噬细胞对疫苗的消化率，使巨噬细胞膜提前凝聚到有效抗原浓度，提前激活免疫系统，穴位常量抗体效价同肌肉常量组相比差异显著[3]。羊注射O型口蹄疫疫苗4个月后，穴位常量、半量免疫注射同肌肉常量相比，抗体效价均表现为差异显著。说明疫苗穴位免疫抗原性更强，抗体浓度维持更长，疫苗保护能力显著提高，这与刁晓平、赵慧英、罗超英等报道的穴位对免疫具有放大作用的理论是完全一致。

4.3穴位免疫O型口蹄疫疫苗半量免疫期能够达到6个月，常量如能达到8个月，就可以选择适当的时间，如秋季9月注苗免疫期就能到第二年5月份，而6～8月份是高温季节，不易发生O型口蹄疫，那样每年就可以只进行一次O型口蹄疫疫苗免疫注射。

4.4从经济效益方面来说，穴位免疫可降低疫苗成本，减少损失。2002年6月末阿拉善左旗有羊120万只，肌注每只大羊需2 ml（约占总数的2/3），小羊1 ml，0.2元/ml，每年两次，共需80万元。而穴位免疫每只大羊1～1.3 ml，小羊0.5～0.7 ml，每年可节省开支26万元。另一方面，肌注O型口蹄疫疫苗出现副作用的发病率至少在2%，死亡率在0.3%，而穴位免疫可使死亡降至0.1%，每年全旗因O型口蹄疫疫苗副作用死亡2次×（0.3%～0.1%）×120万只＝4800只，每只羊200元，每年损失96万元。穴位免疫每年可减少开支损失共计26+96=122万元。

4.5穴位免疫是对中医针灸术的继承和发展，并为传统的针灸术赋予新内容。本课题组下一步，将进行O型口蹄疫疫苗穴位免疫抗体的消长规律进行测试，同时进行推广。

参考文献

［1］刁晓平.疫苗穴位免疫研究进展［J］.中国兽医杂志，2002，38（3）：38～39.

［2］李长卿，孟宪楹，樊斌堂.全国兽医针刺免疫学术研讨会讨论文集［C］.兰州：中国农业科学院科研管理部，1993.

［3］邱成勋，冯丽芳，陈涛.鸡新城疫I系苗穴位与常规免疫效果的比较试验［J］.中兽医医药杂志，2000，19（2）∶15～16.