人类染色体显带技术及观察

实验十九　人类染色体G显带技术及观察

自从20世纪60年代末Carpersson等人发明了染色体显带技术以来，显带技术得到了很大发展，用不同的染料、不同的方法处理染色体标本，可使每条染色体上出现明暗相间不同的带纹，称为显带染色体（banding chromosome）。显带技术可以把人类染色体的个体特征都表现出来，从而可更准确地识别每一条染色体，进行同源染色体配对，提高临床染色体核型分析的准确性。

一、实验目的

掌握人类染色体G显带方法及各号染色体G带带型特征。

二、实验原理

G显带是指以Giemsa染料染色后，使染色体显带的技术。Giemsa染料是由噻嗪和曙红组成的，着色时DNA先与2个噻嗪分子结合，然后再与一个曙红分子结合，形成沉淀物，而DNA的某些部位对染料不敏感，由此形成明暗相间的条带。G显带的方法很多，最常用的是将已固定的染色体制片进行预处理，再用Giemsa染色。预处理可用热、碱、各种蛋白酶、尿素等方法，其中最常用的是胰蛋白酶进行预处理。方法简便，周期短。G显带区的DNA有较丰富的A－T对，有相当一部分中度重复序列DNA可能在G带区，Giemsa染料在G带区的结合与其相应的DNA和非组蛋白有关。

三、实验用品

（1）材料：人外周血染色体玻片标本（未染色）。

（2）器材与仪器：水浴锅、温度计、显微镜、立式染色缸、毛细滴管、刻度吸管。

（3）试剂：0.02%胰酶溶液、磷酸缓冲液、Giemsa原液、生理盐水、0.02% EDTA。

四、实验内容

1.G带胰酶消化法

（1）将用常规方法制好的染色体标本片置60℃烤箱烤片2～8h，或37℃温箱老化3d。

（2）将制片投入37℃0.02%胰酶中，轻轻晃动2～60s。

（3）立即用pH　6.8磷酸缓冲液冲洗后Giemsa染液染色5～10min，自来水冲洗、晾干、镜检。

2.G带胰酶－EDTA消化法

（1）同上的（1）。

（2）将25ml生理盐水和25ml　0.02%EDTA倒入立式染色缸内，配成0.02%胰酶液，将制片放入其中晃动5～20s。

（3）立即用生理盐水洗2次，Giemsa染色5～10min。水洗、晾干、镜检。在低倍镜下选择分散良好、长度适中的分裂象，再转至油镜观察，若染色体边缘发毛，为显带过头；若染色体上未出现带纹，则为显带不足。根据具体情况调整显带时间。

五、注意事项

（1）玻片完全干后，才可置油镜下进行观察。

（2）每次显带均应试处理，以决定正确的显带时间，不可盲目处理所有玻片。

（3）显带效果的判断，应多观察几个长度适中的分裂相，不能仅凭1～2个分裂相的显带效果决定下一步显带时间。

（4）G显带的好坏，首先取决于染色体本身制片的质量，染色体要较长，以早中期为宜，且中期象丰富、分散好，无胞质背景。

（5）标本保存时间不宜太长。时间越长，细胞对胰酶处理的抵抗性越强，片龄长的标本染色后会导致斑点状而非带纹。

六、作业与思考题

选一分散良好、显带清晰分裂象，在纸上绘出染色体分布简要示意图，标出X，3，7，13，21号染色体。

【附录】

人类染色体G带歌谣

一秃二蛇三蝶飘，四像鞭炮五黑腰。　

六号像个小白脸，七盖八下九苗条。　

十号长臂近带好，十一低来十二高。　

十三四五、四二一，十六长臂缢痕大。

十七长臂带脚镣，十八人小肚皮大。　

十九身白扎黑腰，二十头重脚飘飘。　

二十一像葫芦瓢，二十二头上一点黑。

X染色体一担挑，Y长臂带黑脚。