【原理】过氧化物酶（peroxidase，POX）是存在于生物体内的一种酶，在血细胞中主要为髓过氧化物酶（myeloperoxidase，MPO），主要存在于粒细胞和单核细胞中。其染色原理是利用粒细胞、单核细胞内的POX，能使过氧化氢（H2O2）分解，释放出新生态氧，氧化四甲基联苯胺，生成四甲基联苯胺蓝，再与亚硝基铁氰化钠结合，形成稳定的蓝色颗粒，沉淀于细胞质内。
【试剂】
1.0.1%四甲基联苯胺（TMB）乙醇溶液 0.1g TMB溶于100ml 88%乙醇中，储于棕色瓶中，4℃保存。
2.亚硝基铁氰化钠饱和溶液（360g/L） 少量蒸馏水中加入亚硝基铁氰化钠晶体，搅拌直至不再溶解为止，储于棕色瓶中，4℃保存。
3.1% H2O2溶液（新鲜配制） 30% H2O2 1ml加至蒸馏水至29ml。
4.稀H2O2溶液 1% H2O2 1滴加蒸馏水10ml，临用前配制。
5.瑞氏染液。
【操作】
1.取0.1% TMB乙醇溶液1ml，加亚硝基铁氰化钠饱和溶液10μl，在临用前配制。
2.新鲜干燥血片或骨髓片，加0.1% TMB-亚硝基铁氰化钠饱和溶液的混合试剂0.5ml，使布满整张涂片，放置1min。
3.加稀H2O2溶液0.7ml，用洗耳球吹匀，染色5～10min，水洗，待干。
4.用瑞氏染液复染15～30min，水洗，待干，用油镜镜检。
【注意事项】
1.血片或骨髓片应新鲜，立即固定，才能保持酶的活性。
2.TMB配制在85%～88%乙醇溶液中染色效果较好，勿用95%乙醇，否则使显色反应减弱或消失。
3.H2O2溶液需新鲜配制，其浓度过高可抑制酶的活性。粒细胞中若看不见阳性颗粒，表示H2O2浓度太高。H2O2加于血片上若不产生气泡，则表示失效。
4.在涂片上两液混匀时，动作宜轻，以免将阳性颗粒吹散到阴性细胞上。
5.POX的染色方法有复方联苯胺法、二氨基联苯胺法和四甲基联苯胺法等，四甲基联苯胺法是临床上常用的POX染色方法。
【结果】
1.结果判断 在胞质中出现蓝色或蓝黑色颗粒为阳性反应（复染者呈蓝黑色）。阳性程度判断标准如下。
阴性（-）：胞质中无蓝色或蓝黑色颗粒。
弱阳性（+）：胞质中的蓝色或蓝黑色颗粒，量少且细小。
阳性（++）：胞质中的蓝色或蓝黑色颗粒量多，但粗细不一。
强阳性（+++）：胞质中的蓝色或蓝黑色颗粒粗大紧密，充满胞质。
2.结果报告 报告原始细胞的阳性程度或阳性百分率。
【正常血细胞的染色反应】（图3-1）。
1.粒细胞系统 原始粒细胞呈阴性或阳性（分化差的原始粒细胞呈阴性，分化好的原始粒细胞呈阳性），早幼粒细胞及以后幼稚粒细胞均呈阳性，并随细胞发育成熟，阳性反应程度递增。成熟的中性粒细胞中含丰富均匀细小的阳性颗粒，嗜酸性粒细胞中颗粒粗大呈深蓝色，嗜碱性粒细胞呈阴性。
2.单核细胞系统 原单核细胞（早期）呈阴性，幼单、单核细胞呈弱阳性，阳性颗粒细小，颗粒少，分布不均匀。
3.其他细胞 淋巴细胞、巨核细胞、幼红细胞、浆细胞和组织细胞均呈阴性，吞噬细胞有时呈阳性。
【临床意义】
1.帮助鉴别急性白血病的类型
（1）鉴别急性淋巴细胞白血病和急性粒细胞白血病：前者POX染色原始细胞阳性率<3%，后者原始细胞阳性率≥3%。
（2）急性早幼粒细胞白血病与急性单核细胞白血病有时需鉴别：若白血病细胞POX染色呈强阳性反应，应诊断为急性早幼粒细胞白血病（图3-2）。
（3）急性单核细胞白血病有时需与恶性组织细胞病、组织细胞白血病鉴别：异常组织细胞其POX染色呈阴性，而白血病性单核细胞呈弱阳性。
2.成熟中性粒细胞POX活性的变化
（1）活性增高：可见于再生障碍性贫血、感染（特别是化脓性细菌感染）、急性淋巴细胞白血病和慢性淋巴细胞白血病。
（2）活性减低：可见于急性粒细胞白血病、慢性粒细胞白血病、急性单核细胞白血病、放射病、骨髓增生异常综合征和退化的中性粒细胞。
图3-1 正常血细胞POX染色反应
1.成熟中性粒细胞呈强阳性；2.单核细胞呈弱阳性；3.浆细胞阴性；4.晚幼红细胞阴性
图3-2 急性早幼粒细胞白血病POX染色
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