色谱柱的选择

针对待测样品理化性质选择高效液相色谱柱是实现良好色谱分离的重要因素。而柱填料是色谱柱的核心部分，不同的填料决定了色谱柱的不同用途。

4.3.3.1　硅胶基质填料

正相色谱用的固定相通常为硅胶以及其他具有极性官能团，如胺基、氰基等的键合相填料。硅胶表面的硅羟基极性较强，因此，分离次序依据样品中组分的极性大小，弱极性组分最先冲出色谱柱，保留时间短。

而反相色谱中常用的填料是以硅胶为基质，表面键合有极性相对较弱的官能团键合相。常用的反相填料包括C18、C8、C4等，这类色谱柱是目前应用最为广泛的分析型色谱柱。

4.3.3.2　聚合物填料

聚合物填料多为聚苯乙烯－二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸酯等，其重要特点是pH范围广泛，1～14均可使用。相对于C18填料，聚合物填料具有更强的疏水性，其缺点是柱效一般较低。大孔聚合物对于蛋白质等样品的分离非常有效。

4.3.3.3　其他无机填料

其他无机填料如石墨化碳黑、氧化铝、氧化锆等也已经商品化并用于特殊用途的色谱分离。石墨化碳黑不需表面改性即可作为色谱保留的基础，可用于某些几何异构体的分离。氧化铝微粒刚性强，可制成稳定的色谱柱柱床。而氧化锆基质填料耐pH范围为1～14，耐温可达100℃。

除了适用于不同分析目的的填料种类，在选择色谱柱时还要考虑色谱柱长度及内径、填料粒径等因素。对满足HPLC的一般分析要求，色谱柱长度通常选择10～25 cm，柱内径一般为4～6 mm，填料粒径一般为3～10μm。填料的粒径主要影响色谱柱的柱效和背压。粒径越小，分离能力越强，而柱压越大。例如，3μm填料填充柱的柱效比相同条件下的5μm填料的柱效提高近30%;然而，3μm填料填充的色谱柱的背压却是5μm的2倍。