吡啶酚交连物和脱氧吡啶酚交连物测定

一、概 述

由成骨细胞分泌的Ⅰ型胶原三股链螺旋分子被骨基质摄取时。两个螺旋的N末端肽或C末端肽非螺旋部交连,并与另一个胶原分子的螺旋部交连,如同锁条的环扣将胶原分子连接。交连部的氨基酸为吡啶酚交连物(pyridinoline,PYD)和脱氧吡啶酚交连物(deoxypyridinoline,DPD)。这些交连的肽在骨吸收的同时伴随胶原的分解脱落释放入血,由于是低分子化合物(分子量429～591),肾功能正常时在血液中几乎不停留而从尿排泄。交连成分虽然在肌腱、韧带、血管等组织的胶原纤维中也存在,但其代谢不如在骨组织活跃。皮肤胶原不含交连成分,食物明胶虽含有但不被肠道吸收。DPD或PYD在血液或尿中与胶原末端肽结合的结合型约占60%,从结合型中游离的游离型约占40%。用高效液相法(HPLC)法测定,标本须加酸进行预处理,使结合型水解转变为游离型后测定。

尿PYD与DPD的比例与血液和骨胶原中的比例大体一致,PYD的浓度是DPD的3～4倍;PYD与DPD均可作为骨吸收的标记物,但与PYD相比DPD骨特异性更高,近年来,多以DPD作为骨吸收的特异性标记物。

二、病人准备

不受饮食影响;脱氧吡啶酚分泌量在4:00～7:00达峰值,13:00～16:00到最低值,峰值比24h平均值高20%～28%,最低值比平均值低15%～29%,有统计学意义,振幅(峰值到最低值)为37%。

三、标本采集

1.采集时间 夜晚较早晨约减低20%～30%,留第2次晨尿,同时测尿肌酐(uCr),4h内送检。

2.标本保存 避光冷冻保存可稳定半年,反复融冻对检测结果无影响。

四、试验方法及正常参考范围

酶联免疫吸附法:用纯化的抗体包被微孔板,制成固相载体,往包被抗体的微孔中依次加入标本或者标准品、生物素化的抗体、HRP-标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物显色。底物在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的目标蛋白呈正相关。用酶标仪在(450nm)波长下测定OD值(吸光度),计算样品浓度。

正常参考范围 PYD/Cr比值(PYDpmol/Crμmol):成年男性12-80岁(平均46);成年女性绝经期前20-60(平均40)岁,绝经期后30-70(平均50)岁。

不同对象的测定值见表5-1,表5-2。

表5-1 不同情况的尿PYD、DPD的参考范围

(据三木隆已,1993)

表5-2 尿PYD或DPD于Cr比值参考范围

(据日本骨质疏松学会DPD指南,2002版)

五、临床意义

1.增多提示骨吸收增强,见于骨质疏松症、原发性甲状旁腺功能亢进症、皮质醇增多症或长期皮质激素治疗、破骨性疾病(多发性骨髓瘤、骨恶性肿瘤或骨转移癌)、其他骨病(Paget骨病/变形性骨炎、骨软化症、Ehler-Danlos综合征、骨折)。

2.减少见于慢性肾功能不全,高龄者因骨量生成减少而减少。此外,重症灼伤、儿童淋巴细胞白血病有可见减低的报道。