氧化发酵试验

【目的】掌握葡萄糖氧化发酵(O-F)试验,用于区分肠杆菌科细菌和非发酵菌。

【菌种】粪产碱杆菌、大肠埃希菌(ATCC25922)、铜绿假单胞菌(ATCC27853)。

【试剂】无菌液体石蜡。

【器材】Ⅱ级生物安全柜、35℃培养箱、红外线灭菌器(或酒精灯)、O/F发酵管(器材,试剂,培养基)、接种针、无菌吸管、火柴等。

【操作步骤】

1.操作前准备:戴口罩、帽子、手套,穿工作服,准备并清点本试验所需器材。

2.左手持平板或斜面培养基,右手执笔式持接种针,烧灼灭菌,冷却,从平板或斜面培养基上蘸取少量标本(细菌菌种),分别穿刺接种于两支O/F发酵管内。

3.用无菌吸管在其中一支滴加无菌液体石蜡(约1cm高),管口灭菌后加塞,使培养基与空气隔绝,以检测细菌的发酵特征;另一支不滴加灭菌液体石蜡,管口灭菌后加塞,以检测细菌的氧化特征。

4.35℃孵育18～24h。

5.观察结果:铜绿假单胞菌(ATCC27853)加液体石蜡管不变色,不加液体石蜡管变黄色为氧化型;大肠埃希菌(ATCC25922)两管均变黄色为发酵型;粪产碱杆菌两管均不变色为产碱型。

6.操作后正确处理医疗垃圾,实验器材归回原位。

【注意事项】

1.一定要从非选择性培养基上挑取纯的培养物。

2.液体石蜡要灭菌。

3.孵育时间要合适,时间过长则两支发酵管均会变黄色。

4.试验时要用已知菌株作对照。氧化型菌株:铜绿假单胞菌(ATCC27853);发酵型菌株:大肠埃希菌(ATCC25922);产碱型菌株:粪产碱杆菌。

5.整个操作过程须注意无菌操作和生物安全防护。

【技能要点】

1.严格无菌操作。

2.熟练掌握葡萄糖氧化发酵试验步骤。

3.正确判读结果。

(张金艳　郭映辉)