乙型肝炎病毒检查

乙型肝炎病毒（hepatitis B virus HBV，）为引起乙型肝炎（hepatitis B）的病原体（pathogen），嗜肝DNA病毒的原型病毒。HBV的基因结构为双环状DNA，长度约为3 200bp，两链长短不齐，5′端为固定结构，其中有11个核苷酸的重复序列，与复制启动有关。基因编码中有4个开放读码框架，分别编码S、C、X及P基因。

电镜下HBV阳性血清可发现三种颗粒。①大球型Dane颗：颗粒的核心为直径27nm的20面体对称实体，HBcAg（核心抗原），HBeAg（e抗原）及HBxAg（x抗原）位于其上，核心结构最内部为双股环形DNA及DNA polymerase（DNA多聚酶）。在核心外层被复HBsAg（表面抗原）及其糖化蛋白前S1及前S2。②小球型颗粒：不含核酸及多聚酶活性，为组装过程中过剩的HBsAg。③管型颗粒：其直径与小球型颗粒相等，长度50～70nm，为小球型颗粒的缗线状叠连，本质亦为HBsAg。

传染源：乙型肝炎患者及HBV携带者的血液、唾液、精液和阴道分泌物等。

传播方式：HBV是通过破损的皮肤和黏液侵入机体。

传播途径：①血液、血制品传播。HBV在血液中大量存在，经输血、注射、手术及牙科操作等使污染的血液进入人体，即使极微量也可导致感染。②性传播。性行为引起黏膜微小损伤、通过精液、阴道分泌物等也可传播。③母婴传播。主要指围生期感染。在高流行区人群中约40%的携带者来源于母婴子宫内传播和围生期传播。HBsAg携带者母亲发生垂直传播的概率约为5%。④唾液中曾被检出过HBV DNA。⑤医院内污染的器械（如牙科、妇产科器械）亦可导致医院内传播。

【测定方法】

1．抗原、抗体测定

（1）酶联免疫吸附试验（ELISA）：双抗体夹心法。

（2）免疫胶体金法胶体金免疫层析试验（gold immunochromatography assay，GICA）。

（3）自动化分析仪。

2．HBV DNA定量测定 荧光标记探针定量聚合酶链反应（PCR）技术和酶标记探针定量聚合酶链反应（PCR）技术。

【参考范围】

1．抗原、抗体测定为阴性。

2．HBV-DNA为低于最低检出限。

【临床应用价值】

1．乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg） 血清中查到HBsAg的临床意义是HBV感染的确证依据。亚型的检查有助于流行病调查。

2．乙型肝炎病毒表面抗体（AUSAB又称Anti-HBs、HB-sAb、抗-HBs） 由HBsAg刺激机体后产生的保护性抗体，说明乙肝病毒的清除。对疫苗（vaccine）免疫而言，它是免疫成功的标志，一般超过10IU（国际单位，其标准品是由WHO提供，我国鉴定所有二级标准品）即有保护作用。

3．乙型肝炎病毒e抗原（HBeAg） 是由HBV-DNA开放读码框前C区（Pre-C）基因编码产生的含29个氨基酸的分泌型蛋白，是以隐蔽形式存在于核心颗粒中的可溶蛋白。与HBV的活动性复制密切相关，是HBV传染性的重要指标。

HBeAg是一种可溶性蛋白抗原，一般仅见于HBsAg阳性患者的血清中，阴性中偶见。HBeAg出现在血中稍后于HBsAg，消失很快，所以窗口期未出现。

阳性代表HBV正在复制，因此可作为HBV传染性标志。但Pre-C基因变异可产生HBeAg阴性，抗-HBe可呈阳性，病毒复制活跃，病变持续进展。

临床有如下情况一般考虑Pre-C基因发生变异。

（1）HBeAg（-）、抗-HBe（-）或（＋）、HBV-DNA（＋）

（2）活动性肝病，病情加重。

4．乙肝病毒e抗体（抗-HBe也称anti-HBe、HBeAb） Anti-HBe为由HBeAg刺激机体产生的非保护性抗体，说明机体对HBeAg产生免疫应答。有一定保护作用。Anti-HBe紧接着HBeAg消失而出现，表示HBV复制已经减弱，传染性降低。Anti-HBe持续时间不长，几个月后逐渐消退。血清中Anti-HBe的检出意味着病毒复制中止或减少。

但近年来研究表明慢性活动型和重型乙型病毒性肝炎患者血清中抗HBe阳性率较高，在这类患者中50%以上其血清中可检出HBV-DNA，因此，慢性活动型或重型肝炎血清中抗-HBe的阳性可能提示有HBV变异株感染的存在，既无变异的HBV随着抗-HBe的出现而被清除，但变异的HBV继续存在，并逐渐成为感染主体。

5．乙型肝炎病毒核心抗原（HBcAg） HBcAg存在于Dane颗粒核心内部，血清中不以独立单位游离存在。因此主要用于检测病理标本，多用免疫组化法检测，可在肝脏不同病理标本中显示其存在，是HBV存在和复制活跃的直接指标之一，证明患者HBV的感染。

6．乙型肝炎病毒核心抗体（Anti-HBc也称HBcAb、抗-HBc）

抗-HBc-IgM仅出现在急性期，抗-HBcIgM阳性表示HBV复制。高滴度时，特别是恢复期阴转或滴定度明显下降时有助于急性乙型病毒性肝炎的诊断。抗HBc还可以为IgM、IgA、IgG等型，其中抗HBc-IgM的存在，在急性及慢性肝炎中有较高百分率，但仅有辅助诊断参考价值。

抗HBc-IgG，是先出现的抗体。抗-HBc的单独存在说明机体感染过HBV，但为慎重起见可查HBV-DNA以证实HBV的存在情况。体内如抗-HBc与HBsAg同时存在说明有现症感染。如果仅与抗HBs合并存在代表既往感染。当HBsAg消失，而抗HBs还没有出现的这段间隔期，只检出抗-HBe和抗-HBc，此阶段称为核心窗口期。

7．乙型肝炎病毒DNA（HBV-DNA） 已成为临床可查项目，是病原学诊断感染的最直接证据。

【影响因素】

1．实验前因素 ①分离后7d之内测定的血清或血浆标本可放置于2～8℃保存，超过7d在-20℃保存。避免使用溶血、混浊或脂血样本及反复冻融样本。②本文所述的乙型肝炎病毒测定项目无需空腹抽血。③做HBV DNA检测时要注意避免污染问题。

2．实验中因素 ①使用前试剂盒应预先在室温环境中平衡30min。②ELISA法用前摇匀，剩余包被板条应密封保存，以免受潮。③试剂盒在2～8℃避光保存，启用后应尽快用完。④不同批次的试剂组分不能混用。⑤实验后试剂、血清标本均应视为有传染性物质。

（窦亚玲）