监测方法及评价标准

一、空气的微生物学监测

1．采样时间　空气采样应在室内经空气消毒后，尚未进行各种活动前进行。

2．采样方法　大体有两种。

（1）沉降法：普通手术室视室内面积安放培养皿为取9cm的普通营养琼脂培养平皿，面积≤30m2，安放3个点。在室内设一条对角线，取两端及中心3个点，两个顶端各距墙壁1m处。离地面垂直高度为80～150cm；面积＞30m2，安放5个点。取东、西、南、北、中5个点，四角的安放点均距墙壁1m处，在采样点暴露5min后盖好立即送检；洁净手术室按照不同洁净度级别放置培养皿为取9cm的普通营养琼脂培养平皿，在手术室地面上或不高于地面0．8m的任何高度处安放培养皿。100级室内应均匀安放13个点，1　000级室内至少测5个点，10　000及100　000级室内至少测3个点，放置时间为30min。

沉降法不需要特殊采样设备，简便易行，故一般医院空气微生物采样常用此法。

（2）空气采样器：空气微生物采样器有多种，常用的有固体撞击式和离心式空气采样器，其使用方法按产品说明书操作。空气采样器对微生物的捕获率高，可捕获到用沉降法不能采集到的小粒子（空气中活微生物一般均依附于尘埃粒子而形成生物活性粒子）。在洁净室空气监测中，由于经过过滤器作用后进入洁净室的尘埃粒子均＜100μm；如无人为污染和洁净装置无故障的情况下，100级洁净室内＞5μm微尘埃子数应为0，对于这些含微生物的小粒子的捕获，采样器的捕获率要远远高于沉降法。因此，采样器空气采样在洁净室的空气监察中备受重视。

根据国家建设部2002．11．6《医院洁净手术部建筑技术规范》要求，不论用任何方法检测细菌浓度，都必须有两次空白对照，第一次对用于检测的培养皿做对比试验，每批一个对照皿，第二次是在检测时，每室或每区一个对照皿，对操作过程做对照试验：模拟操作过程，但培养皿打开后应又立即封盖。两次对照结果都必须为阴性。整个操作应符合无菌操作的要求。

3．合格标准　沉降法：层流洁净手术室≤10cfu／m3；普通手术室≤200cfu／m3。

说明：评价标准中除菌落生长单位（cfu）数不得超标外，细菌中不得检出有致病性微生物，如沙门菌、乙型溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌。

二、物品和环境表面消毒效果监测

1．采样时间　物品采样应在物品和环境表面消毒处理后4h内进行。

2．采样方法　采样物品表面积＜100cm2，取全部面积，采用棉拭子直接涂擦物体的方法采样；≥100cm2的物品，取100cm2采样，用5cm×5cm的标准灭菌规格板放在被检物体表面，用浸有含相应中和剂的无菌洗脱液的棉拭子在规格板内往返涂抹各5次并随之转动棉拭子，连续采样4个规格板面积。用无菌剪刀剪去手接触部位后，将棉拭子投入含有10ml相应中和剂的无菌洗脱液试管内，立即送检；门把手等不规则物体表面用棉拭子直接涂擦采样。

3．合格标准　监测的细菌菌落总数应≤5cfu／cm2，并未检出致病菌。

三、手、皮肤黏膜消毒效果监测

手的采样应在接触患者、从事医疗或护理活动前进行。手的消毒又分为卫生洗手消毒和外科手术前消毒两种。前者要求洗手消毒后达到消除清洗部位暂驻菌水平；后者洗手消毒后要求达到消除暂驻菌和常驻菌的水平上。皮肤、黏膜消毒主要指手术部位皮肤、黏膜的消毒。

1．手采样方法　被检者五指并拢，用浸有含相应中和剂的无菌洗脱液浸湿的棉拭子在双手指曲面从指跟到指端往返涂擦2次，擦涂过程中同时转动采样棉拭子，剪去手接触部分，将棉拭子投入10ml含相应中和剂的无菌洗脱液试管内，立即送检。

2．皮肤黏膜采样方法　用5cm×5cm的标准灭菌规格板，放在被检皮肤处，用浸有含相应中和剂和无菌洗脱液的棉拭子，在规格板内横竖往返均匀涂抹各5次，并随之转动棉拭子，用无菌剪刀剪去手接触部分，将棉拭子投入10ml相应中和剂的无菌洗脱液试管内送检。不规则的黏膜皮肤处可用棉拭子直接涂擦采样。

3．合格标准　①卫生手消毒，监测的细菌菌落总数应≤10cfu／cm2；②外科手消毒，监测的细菌菌落总数应≤5cfu／cm2；③皮肤黏膜：参照手的卫生学标准执行。

四、消毒液的监测

消毒液的监测包括消毒液浓度的监测和消毒液微生物监测。

1．采样时间　使用后至更换新消毒液前。

2．监测方法

（1）消毒液有效成分测定：①使用市售的相应简易浓度试纸进行含量测定，如含氯制剂和戊二醛试纸；②无浓度测试纸的消毒液可通过药物检测的手段定期对消毒液进行含量测定；监测用试纸或试剂需经卫生行政部门认可。

（2）消毒液染菌量测定：用无菌注射器或吸管取消毒液1ml，注入含相应中和剂9ml的采样管中混匀，立即送检。

3．合格标准　消毒液有效成分达到规定要求；使用中消毒液染菌量≤100cfu／ml，并未检出致病菌为合格。

五、无菌物品的监测

无菌物品有经热力灭菌物品和使用化学灭菌剂或消毒剂浸泡灭菌物品两种。除对无菌物品进行采样外，前者的监测还包括无菌物品包的内、外指示卡，指示胶带颜色变化情况。

1．采样时间　经灭菌处理后、存放有效期内采样。目前尚有部分地区使用的化学消毒剂浸泡处理的无菌物品，采样前须经无菌生理盐水充分冲洗后采样。

2．采样方法　手术钳、镊子等大件医疗器械取2份以上用沾有无菌洗脱液的棉拭子在被检物体表面反复涂擦采样，用无菌剪刀剪去棉拭子与手接触部分后投入5ml无菌洗脱液中；小件医疗器械如缝针、刀片等，每管取5件直接投入5ml无菌洗脱液中；无菌注射器采样时应取5支被检注射器在5ml无菌洗脱液中各抽取5次；可用破坏性方法取样的医疗用品如硅胶输液、输血装置，无菌敷料、引流条、棉球、纱布等，用无菌剪刀剪取适量样本直接投入5ml无菌洗脱液中送检。

3．合格标准　经热力灭菌后的化学指示胶带、指示卡均变至规定的条件；无菌物品不得检出任何活的微生物。