石蜡切片制备

石蜡切片常用的切片机有轮转式切片机、平推式切片机两大类。在我国大部分病理技术室使用的都是轮转式切片机。切片机的关键部分是控制切片厚度的微动装置、装置切片刀的刀台和装置组织块支持器的机头。以上这些结构均被安装在1个铁制的台座上。切片机虽有多种式样和型号，但结构原理基本上都是类似的，要求机体要稳、微动要精确、刀台和机头稳固。

【切片准备】

（1）将包埋的每块组织周围过多的石蜡切去，组织四周留约2mm的石蜡边。现多用包埋盒。

（2）打开摊片机、烤片机并调试好温度（摊片最好用温蒸馏水或温开水。摊片温度一般45℃左右，烤片温度一般60℃左右）。

（3）备好各项用品，如大、中号优质狼毫毛笔，眼科弯镊子、洁净载玻片、记号笔等。

（4）装上切片刀（目前多用一次性刀片），设定切片厚度（一般4～5μm）。

【制作过程】

（1）先旋动切片机手轮，使蜡块夹头升至最高位置时，锁住机头，将预先冷却的蜡块装在蜡块固定器上，并调整蜡块的角度，使蜡块与切片刀平行。

（2）调整刀的高度和倾斜度（15°～30°）。切片刀若与蜡块距离太大，扳起固定手把，移动刀座后再锁紧。

（3）扳起锁柄，右手旋动切片机手把，左手快进修切蜡块，待蜡块组织切全时，按设定厚度切片。左手持毛笔把切出来的切片带轻轻托起，再用眼科弯镊子轻镊蜡片，从正面放入摊片槽内（水温依石蜡熔点而定，一般45℃左右），待蜡片摊平整后，用弯镊子分开蜡片，找完整的蜡片捞贴于载玻片上，或用镊子调整使切片中点移至载玻片的2／3与1／3交界处。

（4）切片贴附好后，擦去背面的水，放在空气中稍晾干，即进行烤片（烤片温度依蜡的熔点而定一般60℃左右）。血块组织、皮肤组织须及时烤片。但对脑组织（人体较大组织）待完全晾干后，才能进行烤片。这样可防止产生气泡影响染色。烤片30min左右，蜡片可牢固地贴于载玻片上。

【注意事项】

（1）要求切片刀锋利，刀口无缺损。否则不能顺利连续切片，组织细胞会被挤压不能平展、切片易断裂、破碎或不完整。

（2）蜡块四周在切片时应修切整齐，尤其是上下缘，要求平行，否则切片弯曲不直，无法连成带状。

（3）切片刀及蜡块都要固定牢固，机身的各个部件及螺丝应旋紧，不可产生震动，摇动切片机时，用力不能过猛，以保持机身平稳，防止震动，否则切片厚薄不均。

（4）切片刀倾斜角不宜过大或过小，以20°～30°为佳，角度过大则切片上卷，过小则切片皱起。

（5）石蜡过软或室温过高，切片易黏于切片刀上或皱缩在一起不好展开，此时可将蜡块置于冷台上冷冻后再切。反之，如室温低或石蜡过硬，切不成片时，可在蜡块切面上哈气加温。

（6）组织的取材和固定。取材时组织块的大小厚薄应适当、固定及时完全，才能制成满意的切片。陈旧、腐败、干涸或固定不当的组织，不会制成理想的切片。也会影响染色，无法观察。因此，组织块的前期处理是制备良好切片的基础。

（7）组织脱水、透明、浸蜡过度，组织会过硬、变脆，特别是小组织应严格控制各步骤的时间。如果组织过硬、变脆，可将蜡块的组织面浸入60%乙醇甘油溶液中软化。组织脱水不足，蜡不能充分浸入切不成切片时，可逐步退回去重新脱水。