【摘要】：用乙酸戊酯把反应中形成的蓝色产物抽提到有机溶剂相进行浓缩，灵敏度有所提高。待测样品浓度在10～70μg/mL DNA范围内吸光度与DNA的浓度成线性关系。注意DNA在水内较难溶，需隔夜配制；4．乙酸戊酯。
改良二苯胺法_生物化学实验
三、改良二苯胺法
（一）实验原理
同二苯胺法。用乙酸戊酯把反应中形成的蓝色产物抽提到有机溶剂相进行浓缩，灵敏度有所提高。
所得反应的产物同样在595nm有最大吸收值。待测样品浓度在10～70μg/mL DNA范围内吸光度与DNA的浓度成线性关系。
（二）实验药品
1．4％二苯胺冰醋酸溶液：4g二苯胺加少量冰醋酸加热溶解后，加冰醋酸至100mL，当天使用；
2．20％过氯酸：71.4mL 70％过氯酸（A.R.）加水至250mL；
3．DNA标准溶液：配成100μg/mL。注意DNA在水内较难溶，需隔夜配制；
4．乙酸戊酯（C.P.）。
（三）实验方法
1．标准曲线的制作
分别吸取100μg/mL DNA的标准溶液0mL、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL、1.2mL、1.4mL至各个测定管中，每管加水至2mL，再加2mL 20％过氯酸，4mL4％二苯胺，充分摇匀，在56℃下保温1h，流动水冷却，每管加2mL乙酸戊酯，剧烈摇动混匀，静止放置5～10min或经3000r/min离心1min，使混合液分成有机相和水相两层，在波长595nm下测定有机相的吸光度（用0.5cm比色皿）。以吸光度为纵坐标、DNA量（μg）为横坐标，绘制标准曲线。
2．样品中DNA含量的测定
样品用水配成20～60μg/mL浓度，吸取2mL加2mL20％过氯酸，4mL4％二苯胺，充分摇匀，以后同标准曲线制作步骤一样操作，空白以水代DNA，从标准曲线查出样品中DNA量，再根据稀释倍数算出样品中DNA含量。
（四）实验记录
1．标准曲线的绘制
2．实验记录
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