一、减少生物污染
由于一般的污染发生在细胞培养操作过程中，所以良好的细胞培养操作环境和操作习惯是减少生物污染的关键。
（一）注意实验室的清洁管理
细胞培养要用专门的房间，注意保持房间的清洁。超净台应定期检验，合格才能使用。在使用超净台前开启通风装置并打开紫外灯灭菌30min。操作时要戴一次性橡胶手套，并喷洒70%乙醇消毒。任何带入超净台的非无菌物件都要喷洒70%乙醇消毒。收集废培养液的瓶子要加入漂白粉或漂白液，以避免微生物的生长。每次实验完后，要向通向废培养液瓶的塑料管内喷洒70%乙醇，并且用蒸馏水和70%乙醇先后擦拭台面。加热培养液的37°C恒温水浴箱中非常容易有微生物的生长，从而成为一个重要的污染源，所以需要定期，擦洗培养箱。细胞培养箱内的用于保持湿度的水盘也需要定期清洗，最好加用无菌蒸馏水。
（二）建立良好的操作习惯
操作者责任心要强，要细心稳重，操作技术要熟练。进无菌室前要用肥皂洗手或用5%苯扎溴铵浸泡5min，按规定穿隔离衣。进入后关好门，尽量少走动。工作开始要先用75%乙醇棉球擦手、擦瓶口和烧灼瓶口。事先要严格检查器材、溶液和培养物，不要把污染品或未经消毒的物品带入无菌室内，更不能随便使用，以免造成大批污染。操作者动作要轻，必须在火焰周围无菌区内打开瓶口，并将瓶口转动烧灼。操作时尽量不要谈话，若打喷嚏或咳嗽应转向背面。操作时要常更换吸管，切勿一根吸管做到底。一旦发现吸管口接触了手和其他污染物品应弃去。
为了减少不同细胞株间的相互污染，不要用同一瓶培养液或胰酶培养不同的细胞；不要在一个超净台上同时进行多种细胞的操作。不同种类的细胞要做到标记清楚。每次小量使用的溶液（如胰酶、抗生素、谷氨酸溶液）应分装，尽可能减少多次使用时的污染风险。
（三）珍贵细胞扩增建库
即使再小心，污染难免还是会发生。所以得到一个新的细胞株后应尽快将细胞生长扩增、冻存，以备不测。因此，建立细胞冻存库是减少污染对细胞培养的影响所必需的。细胞冻存库应该分主细胞库（master cell bank，MCB）和工作细胞库（working cell bank，WCB），当需要做实验时从主细胞库中复苏细胞建立工作细胞库。每一个冻存标本都应明确记录细胞的性质、代数及有无污染。同时，还应建立规范的检测程序进行菌检及细胞鉴定。
二、减少化学污染
对于自己用粉末配制培养液的实验室来说，配制培养液要使用重蒸馏水，以减少带入化学污染的机会。如果要添加NaHCO3，要选用纯度高的NaHCO3，最好是经过细胞培养测试的。另外尽量使用一次性的细胞培养器皿。由于标准厂家一次性细胞培养器皿的生产环境比较严格，得到的产品洁净度很高，从而减少了由细胞培养器皿带入污染的机会。
由于内毒素会对很多种细胞产生刺激，影响实验结果，所以在实验中要尽量减少在培养液中的内毒素的来源。来自标准厂家的血清和培养液中的内毒素含量很少。所以，内毒素的来源主要是水、添加剂、细胞培养器皿等。盛水器具上的细菌内毒素可能给超纯水带来污染。长时间放置的超纯水也可因盛水器具上细菌生长而污染细菌内毒素。内毒素能紧密地黏在玻璃器皿上，实验室里用普通方法不能完全消除内毒素。用250℃、30min或180℃、2h干热灭菌能完全除掉玻璃器皿上的内毒素。不能高温去除的塑料器皿、胶管、瓶塞等可用卫生部推荐的三效热原灭活剂浸泡清除热原。
三、减少物理污染
通过实验室的合理设计及建立规范的操作规程，可以减少环境中物理因素对细胞的影响。孵箱应放在温度较恒定的环境中，周围不能放置能引起机械振动的设备，如离心机。培养液及培养试剂应放在固定的位置，为避免光照，试剂不能放在玻璃门的冰箱中，试剂周围不能摆放放射性核素。培养液从冰箱中取出后应在室温中放置一段时间后再进行实验，以避免过冷的温度对细胞产生影响。
（朱堂友 伍津津）
参 考 文 献
［1］张卓然．培养细胞学与细胞培养技术．上海：上海科学技术出版社，2004：57－60
［2］鄂征．组织培养和分子细胞学技术．北京：北京出版社，1994：112－119［3］R．I．弗雷谢尼．动物细胞培养－基本技术指南．章静波，徐存拴，等，译．第4版．北京：科学出版社，2004：334－348
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