多氯联苯的测定

下面介绍GB/T5009.190—2006气相色谱法测定多氯联苯，适用于鱼类、贝类、蛋类、肉类、奶类等动物源性食品及其制品和油脂类样品中指示性PCBs的测定。

1.原理

以PCB198为定量内标，在试样中加入PCB198，水浴加热振荡提取后，经硫酸处理、色谱柱层析净化，采用气相色谱-电子捕获检测器法测定，以保留时间定性，内标法定量。

2.试剂与材料

农残级: 正己烷、二氯甲烷、丙酮。

优级纯: 浓硫酸、无水硫酸钠(将市售无水硫酸钠装入玻璃色谱柱，依次用正己烷和二氯甲烷淋洗两次，每次使用的溶剂体积约为无水硫酸钠体积的两倍。淋洗后，将无水硫酸钠转移至烧瓶中，在50℃下烘烤至干，并在225℃烘烤过夜，冷却后干燥器中保存)。

碱性氧化铝，色谱层析用碱性氧化铝。将市售色谱填料在660℃中烘烤6h，冷却后于干燥器中保存。

指示性多氯联苯的系列标准溶液，见表12-4。

表12－4 GC－ECD方法中指示性多氯联苯的系列标准溶液

3.仪器

气相色谱仪，配有电子捕获检测器(ECD); 色谱柱: DB-5ms柱，30m×0.25mm× 0.25μm或等效色谱柱; 组织匀浆器; 绞肉机; 旋转蒸发仪; 氮气浓缩器; 超声波清洗器; 漩涡振荡器; 分析天平; 水浴振荡器; 离心机; 层析柱。

4.操作概要

1)提取

(1)固体试样

称取试样5.00～10.00g，置于具塞锥形瓶中，加入定量内标PCB198后，以适量正己烷 二氯甲烷(1 1，体积比)为提取溶液，于水浴振荡器上提取2h，水浴温度为40℃，振荡速度为200r/min。

(2)液体试样(不包括油脂类样品)

称取试样10.00g，置于具塞锥形瓶中，加入定量内标PCB198和草酸钠0.5g，加甲醇10m L摇匀，加20m L乙醚 正己烷(1 3，体积比)振荡提取20min，以3000r/min离心5 min，取上清液过装有5g无水硫酸钠的玻璃柱; 残渣加20m L乙醚 正己烷(1 3，体积比)，重复以上过程，合并提取液。将提取液转移到茄型瓶中，旋转蒸发浓缩至近干。如分析结果以脂肪计，则需要测定试样脂肪含量。

(3)试样脂肪的测定

浓缩前准确称取茄型瓶质量，将溶剂浓缩至干后，再次准确称取茄型瓶及残渣质量，两次称重结果的差值即为试样的脂肪含量。

2)净化

(1)硫酸净化

将浓缩的提取液移至5m L试管中，用正己烷洗涤茄型瓶3～4次，洗液并入浓缩液中，用正己烷定容至刻度，并加入0.5m L浓硫酸，振摇1min，以3000r/min的转速离心5min，使硫酸层和有机层分离。如果上层溶液仍然有颜色，表明脂肪未完全除去，再加入0.5m L的浓硫酸，重复操作，直至上层溶液呈无色。

(2)碱性氧化铝柱净化

玻璃柱底端加入少量玻璃棉后，从底部开始，依次装入2.5g活化碱性氧化铝、2g无水硫酸钠，用15m L正己烷预淋洗。

(3)净化

将硫酸净化中的浓缩液转移至层析柱上，用约5m L正己烷洗涤茄型瓶3～4次，洗液一并转移至层析柱中。当液面降至无水硫酸钠层时，加入30m L正己烷(2×15m L)洗脱; 当液面降至无水硫酸钠层时，用25m L二氯甲烷:正己烷(5:95，体积比)洗脱。洗脱液旋转蒸发浓缩至近干。

(4)试样溶液浓缩

将试样溶液转移至进样瓶中，用少量正己烷洗茄型瓶3～4次，洗液并入进样瓶中，在氮气流下浓缩至1m L，待GC分析。

3)测定

(1)色谱条件

色谱柱: DB-5柱，30m×0.25mm×0.25um或等效色谱柱; 进样口温度: 290℃; 升温程序: 开始温度90℃，保持0.5min; 以15℃/min升温至200℃，保持5min; 以2.5℃/min升温至250℃，保持2min; 以20℃/min升温至265℃，保持5min; 载气: 高纯氮气(纯度大于99.999%)，柱前压67k Pa，相当于10psi; 进样量: 不分流进样1μL; 色谱分析: 以保留时间定性，以试样和标准的峰高或峰面积比较定量。

(2)PCBs的定性分析

以保留时间或相对保留时间进行定性分析，要求PCBs色谱峰信噪比(S/N)大于3。

(3)PCBs的定量测定

采用内标法，以相对响应因子(RRF)进行定量计算。

5.结果计算

首先按式12-9计算目标化合物对定量内标的相对响应因子RRF，然后按式12-10计算PCBs。

式中: RRF——目标化合物对定量内标的相对响应因子;

An——目标化合物的峰面积;

cs——定量内标的浓度，单位为微克每升(μg/L);

As——定量内标的峰面积;

cn——目标化合物的浓度，单位为微克每升(μg/L)。

注: 在系列标准溶液中，各目标化合物的RRF值相对标准偏差(RSD)应小于20%。

式中: Xn——目标化合物的含量，单位为微克每千克(μg/kg);

An——目标化合物的峰面积;

ms——试样中加入定量内标的量，单位为纳克(ng);

As——定量内标的峰面积;

RRF——目标化合物对定量内标的相对响应因子;

m——取样量，单位为克(g)。