黄腐酸钠对小鼠胃肠运动及胃溃疡的实验研究

黄腐酸钠对小鼠胃肠运动及胃溃疡的实验研究

李月梅1 李宝才1 李  鹏1 刘建珍1 崔佳丽1 梅展青2

（1 昆明理工大学生命科学与技术学院 昆明 650224

2 香港满好集团云南满好肥料有限公司 昆明 650106）

摘  要：研究黄腐酸钠对小鼠胃肠运动的影响及对胃溃疡的保护作用。以黑色炭末为指示剂，通过测定正常小鼠、复方地芬诺酯所致的小鼠小肠推进抑制、生大黄致小鼠脾虚腹泻模型的炭末推进百分率，观察黄腐酸钠(100 mg/kg，200 mg/kg，ig)对小鼠肠运动的影响；采用无水乙醇灌胃造成小鼠急性胃溃疡，观察黄腐酸钠预防给药(100 mg/kg，200 mg/kg，ig)对胃黏膜损伤的保护作用，计算溃疡指数和溃疡抑制率。黄腐酸钠灌胃对正常小鼠、生大黄致小鼠腹泻模型均有一定抑制胃肠运动作用，对复方地芬诺酯所致小鼠胃肠运动减弱有明显的协同作用；对无水乙醇引起的小鼠胃黏膜损伤有保护作用，高剂量黄腐酸钠与阳性对照药物雷尼替丁的溃疡指数和溃疡抑制率无显著性差异。黄腐酸钠具有止泻、抗胃溃疡、保护胃黏膜损伤的作用。

关键词：黄腐酸钠 胃肠运动 脾虚 胃溃疡

Effects of Na - FA on Gastrointestinal Movement and Gastriculcer in Mice

Li Yuemei1, Li Baocai1, Li Peng1, Liu Janzhen1, Cui Jiali1, Mei Zhanqing2

(1 Faculty of Life Science and Technology, Kunming University of Science and Technology, Kunming, 650224

2 Hongkong Manhao Group Yunnan Manhao Fertilizer Co. Ltd., Kunming, 650106)

Abstract: To study the effects of FA-Na on gastrointestinal movement and the protective effects on gastric ulcer models. Using charcoal powder as an indicator, oberserve the effects of FA-Na(100 mg/kg, 200 mg/kg, ig) on bowel movement of mice by determining the propulsive percentage of charcoal powder in normal mice, inhibition of small intestinal propulsion model induced by compound diphenoxylate and spleen asthenia and diarrhea model caused by Radix et Rhizoma Rhei; The acute gastric ulcer model was induced by intragastric alcohol given orally, observe the protective effect of FA-Na(100 mg/kg, 200 mg/kg, ig) given ahead on gastric injury, reckon the ulcer index and the inhibition ratio of ulcer. FA-Na(intragastric administration) had some inhibit effect on normal mice and diarrhea model caused by Radix et Rhizoma Rhei, remarkedly synergetic effect on gastrointestinal asynersis induced by Compound Diphenoxylate, and protective effect on mice gastric mucosal injury cause by dehydrated alcohol. Compared with the positive control durg Ranitidine(50mg/kg), the ulcer index and ulcer inhibition ratio large doses of FA-Na had no significant difference. FANa has the effects of antidiarrheal and anti-gastric ulcer.

Key words: FA-Na; gastrointestinal movement; spleen asthenia; gastric ulcer

腐植酸(humic acid，简称HA)是一种复杂的天然大分子有机弱酸，是由自然界植物残体经过腐解后形成的产物，属于一种芳香族复合物，其化学结构迄今尚未完全清楚，经过研究发现分子内含有羧基、羰基、醌基、酚基等多种官能团。现已发现腐植酸及其盐类具有抗溃疡、消炎、去风湿、抗病毒、增强三氧化二砷抗宫颈癌的药效等作用[1～5]。不同产地的FA因煤化程度和提取方法不同而药效各异。黄腐酸(fulvic acid，简称FA)是HA中分子量最小、溶解度最高、生物活性最强、吸收效果最佳的部分，故药用中以FA及其盐类为主。本实验采用从年青褐煤中提取的黄腐酸钠，研究其对腹泻及胃溃疡的作用。

1  材料

1.1 药物经及试剂

黄腐酸钠，本实验室提供。生大黄(Rheum officinale Raill)，购于云南绿生药业有限公司,将原生药粉碎后过200目筛,临用前制成10%的混悬液。复方地芬诺酯，常州康普药业有限公司批号0906030),2.5毫克/片,制成混悬液,浓度为0.1 g/ L。人参健脾丸，北京同仁堂制药有限公司生产,批号20090301。雷尼替丁。羧甲基纤维素钠800～1200，国药集团化学试剂有限公司。活性炭，天津市化学试剂六厂三分厂。

1.2 动物

清洁型昆明种小白鼠，体重(20±2) g，购自昆明医学院实验动物中心。

2  方法

2.1 FA-Na对正常小鼠及复方地芬诺酯所致的小鼠小肠推进抑制的影响

参考文献[6]方法加以改进。昆明种小鼠60只随机分为空白对照组、便秘模型组、便秘给药组(低、高剂量给药组)、正常给药组(低、高剂量给药组)6组,每组10只。除空白组和便秘模型组灌胃(ig)蒸馏水外,其余各组ig相应药液。给药量均为0.01 mL/g,每天1次,连续7 d。各组动物禁食不禁水12 h后,各给药组先灌服FA-Na(100、200 mg/kg),空白对照组及模型组灌服同体积生理盐水。灌胃给药40 min后,便秘模型组及便秘给药组均以复方地芬诺酯0.01 mL/g灌胃,空白对照组及正常给药组予同体积生理盐水。药后20 min,每鼠ig 5%的炭末混悬液(用1%的羧甲基纤维素钠配制)0.01 mL/g。20 min后, 脱颈椎处死小鼠，打开腹腔仔细分离肠系膜,剪取上端自幽门,下端至回盲部的肠管,轻轻将肠管不加牵引平铺于玻璃板上,用米尺测量小肠总长度和墨汁推进的距离。按下列公式计算炭末推进率。

炭末推进率(%)=炭末在肠内推动距离/小肠总长度×100%

2.2 FA-Na对脾虚小鼠体重及胃肠运动的影响(生大黄粉致小鼠脾虚模型)

参考文献[7]方法，加以改进。雄性小鼠50只，体重18～22 g，随机分为5组，每组10只。除正常对照组外，其余各组均ig给予10%的生大黄粉混悬液，每次0.015 mL/g，每日2次，连续给药15 d，造成小鼠脾虚模型。自给生大黄粉混悬液的第3天起，人参健脾丸组和FA-Na组开始ig相应药物，每日1次，连续13 d。模型及正常对照组给等体积的蒸馏水。在给药过程中，随时观察小鼠的粪便及体征变化，每日给药前称量小鼠的体重。小鼠于实验前12 h禁食，第16天再给药1次，药后1.5 h给小鼠ig 5%的炭末混悬液0.01 mL/g体重，20 min后，脱颈椎处死小鼠，立即剖腹取出小肠全长，记录炭末前沿至幽门的距离，计算占小肠全长的百分比。

2.3  FA-Na对无水乙醇致胃溃疡的影响

小鼠40只,随机分为4组,模型组，FA-Na低、高剂量组和雷尼替丁阳性对照组,每组10只。FA-Na组灌服FA-Na(100、200 mg/kg)，连续6 d。雷尼替丁组ig给药50 mg/kg,连续6 d。正常对照组和模型组则灌服蒸馏水0.01 mL/g,连续6 d。末次给药后次日，小鼠自由饮水,除正常对照组外其余3组小鼠禁食24 h后灌胃无水乙醇0.01 mL/g造成急性胃黏膜损伤，1 h后脱颈椎处死小鼠,打开腹腔结扎贲门、幽门，1%甲醛溶液1 mL ig,结扎贲门部,游离胃,并置1%甲醛溶液10 min后,沿胃大弯剪开，0.85%氯化钠溶液冲去内容物,展平，放大镜下观察胃粘膜，按Guth标准[8]计算溃疡指数和抑制率。

溃疡抑制率(%)=(损伤模型组溃疡指数-给药组溃疡指数)/损伤模型组溃疡指数×100。

2.4 统计学处理方法

采用SPSS 17.0统计软件处理,数据用均值±标准差(±s)表示,进行组间t检验分析,判断其差异显著性，P<0.05表示有显著性统计学差异。

3  结果

3.1 FA-Na对正常小鼠及复方地芬诺酯所致的小鼠小肠推进抑制的影响

试验表明FA-Na具有抑制小鼠小肠蠕动的作用,但与空白组比较无显著性差异。见表1。

复方地芬诺酯与正常对照组比较,可明显抑制小鼠的小肠推进运动(P<0.01)；FA-Na对复方地芬诺酯所致的小鼠小肠推进减弱有促进作用(P<0.05)。FA-Na对复方地芬诺酯所致小鼠胃肠运动减弱有明显的协同作用，结果见表2。

3.2 FA-Na对脾虚小鼠体征、体重及小肠碳末推进运动的影响

10%的生大黄粉混悬液连续给药16 d,模型组及各给药组小鼠于造模当天4 h后即开始软便,部分小鼠泄泻,第4天则出现食欲减退、活动减少、行动迟缓、竖毛拱背、毛色失泽等脾虚症状。正常对照组则无上述现象。于造模后第3天各给药组开始ig FA-Na,连续给药14 d。各给药组小鼠的毛色及精神状态均明显好于模型组。

10%的生大黄粉混悬液连续给药1 6d,与正常对照组比较,可使小鼠的体重显著下降。FA-Na组与模型对照组比较无明显差异(P>0.05)。结果显示, FA-Na对生大黄粉混悬液所致的脾虚小鼠体重下降无明显的提升作用，见表3。

注：★P<0.01 vs正常对照组；▲P<0.05 vs复方地诺酚酯。

注：★P<0.01 vs正常对照组。

10%的生大黄粉混悬液连续给药16 d,与正常对照组比较,可使小鼠的胃肠推进运动明显加快(P<0.05)；FA-Na连续口服给药14 d,均可使脾虚模型小鼠的胃肠运动显著减慢(P<0.05， P<0.01)。结果显示，FA-Na对生大黄粉混悬液所致的脾虚小鼠胃肠运动加快有明显的拮抗作用,使胃肠运动机能趋于正常，见表4。

注：▲P<0.05 vs正常对照组；★P<0.05 vs模型组；★★P<0.01 vs模型组。

3.3 FA-Na对无水乙醇致胃溃疡的影响

乙醇损伤模型组可见胃黏膜有不同程度的损伤，黏膜明显出血、大面积糜烂黏膜表面附着血痂。FA-Na高、低量组和雷尼替丁组仅有轻度胃黏膜充血，见明显糜烂。

与正常对照组比较，乙醇损伤组小鼠的胃黏膜溃疡指数显著增加(P<0.01)；与乙醇损伤组比较，FA-Na高、低剂量组和雷尼替丁对照组的溃疡指数均显著降低(P<0.01)，并且FA-Na高剂量组对乙醇损伤胃黏膜的抑制作用较雷尼替丁相似(P>0.05)，结果见表5。

表5 FA-Na对无水乙醇致胃溃疡的影响
Tab.5 Effects of FA-Na on dehydrated alcohol impaired gastric ulcer in mice

注：▲P<0.01 vs模型组。

4  结论与讨论

本实验重点研究了黄腐酸钠对正常小鼠、复方地芬诺酯所致的小鼠小肠推进抑制、生大黄致小鼠脾虚腹泻模型及无水乙醇致胃溃疡的影响。实验结果表明，黄腐酸钠能够抑制正常小鼠的胃肠运动；显著促进复方地芬诺酯所致的小鼠胃肠运动减弱；明显改善脾虚小鼠的体征；抑制脾虚小鼠的胃肠运动、对抗泄泻；对乙醇致溃疡有明显的保护作用,能抑制溃疡的形成。

FA-Na对复方地芬诺酯所致小鼠胃肠运动减弱有明显地协同作用。于吉人等[9]发现酚妥拉明可以减弱泥炭腐植酸对胃肠运动的抑制作用。黄腐酸钠通过作用于α受体与直接作用于胃肠道平滑肌而起作用。无水乙醇所致胃溃疡是由于酒精直接损伤胃粘膜，从而引起胃壁血液循环障碍、组织坏死脱落导致溃疡形成，另外，乙醇可以刺激胃剧烈蠕动，引起机械性胃损伤[10]。黄腐酸钠抗溃疡作用机制，可能与降低胃液酸度和抗菌作用有关。

参考文献

[ 1 ]祝亚勤，王洪杰，李秀宏，等.草炭腐植酸钠抗溃疡作用的研究[J].腐植酸，1998，(3):24

[ 2 ]祝亚勤，李燕敏，唐丽等.草炭腐植酸抗炎镇痛作用的实验研究[J].腐植酸，2000，(2): 25～27

[ 3 ]王洪杰，祝亚勤，李燕敏，等.草炭黄腐(下转251页)(上接204页) 植酸钠对风湿性和类风湿性关节炎的临床疗效观察[J].中医药学报，1996，(3) :23

[ 4 ]Klöcking R & Sprößig M . Antiviral properties of humic acids[J]. Experientia,1972, 28:607

[ 5 ]Hung CT, Cheng CY, Wen KC,et al. Humic acid enhances the cytotoxic effects of arsenic trioxide on human cervical cancer cells [J]. Environmental Toxicology and Pharmacology,2010, 29:117～125

[ 6 ]陈奇.中药药理研究方法[M]. 北京: 人民卫生出版社，1993:332

[ 7 ]中华人民共和国卫生部药政管理局.中药新药研究指南[S].1994

[ 8 ]Guth PH , Aures D , Panlsen G. Topica aspirin plus HCl gastric lesions in the rat [J].Gastroedterology, 1979 ,76 (1):881

[ 9 ]于吉人，顾猛进，王德民，等.泥炭腐植酸对小鼠胃肠推进运动的影响[J].北京医学院学报，1983，15(1增刊):1～3

[ 10 ]陈志东.消化性胃溃疡模型在研究新药中的应用[J].现代中西医结合杂志，2006，15 (15):2137～2138